荧光标记法在生物中有哪些实验?荧光基团在使用中如何选择?

荧光标记法在生物中有哪些实验

当选择荧光基团时,每个实验都应考虑每个荧光基团的激发和发射光谱。如果需要共同定位两种不同的蛋白质,应避免发射光谱重叠。

建议选择消光系数高,量子产率高的荧光基团。荧光基团亮度的一个决定因素是其消光系数; 消光系数越高,荧光团越亮,量子产率是荧光过程效率的读数

光漂白是降低荧光信号强度的光化学过程,例如已知FITC和R-藻红蛋白具有相对较高的光漂白率。

我们建议避免对光漂白高度敏感的荧光团,一些光稳定荧光团包括DyLightTM、AlexaFluorTM、ATTO染料。或者可以使用抑制光漂白的抗淬灭剂来保存荧光标记的靶分子的信号。

 

 荧光标记法在生物中有哪些实验?荧光基团在使用中如何选择?

荧光物标记法介绍:

荧光物标记法,神经纤维的末梢可以吸收很多荧光化合物或荧光染料,经轴突逆向运输到细胞体内,从而建立逆行荧光标记法。例如:Kuypers等(1977)用这种方法在荧光显微镜下根据所用荧光物标记物特有的波长显示吸收荧光物的神经细胞。

用于神经元标定的荧光物质有十多种。可以根据实验的要求进行单荧光物、双标定和三标定。后者可以用来做神经元轴突侧枝投射的追踪。

荧光标记法在生物中有哪些实验?荧光基团在使用中如何选择?

上海金畔生物提供酶HRP,荧光FITC,Biotin、Cy3、Cy5、Cy7、罗丹明等荧光物质标记蛋白,标记位置是氨基,标记的蛋白有:牛血红蛋白、胶原蛋白、链霉亲和素、大鼠免疫球蛋白、牛胎球蛋白、人转铁蛋白、胰岛素、重组蛋白G等几十种蛋白,提供检测图谱。

金畔生物提供荧光标记蛋白产品列表:

Biotin -羊IgG干粉,羊免疫球蛋白;Biotin -IgG from sheep serum

Biotin -氧化低密度脂蛋白(人); Biotin -Oxidized Humhai LDL; OxLDL

Biotin-胰岛素(牛);牛胰岛素;Biotin -INSULIN

Cy5.5-胰岛素(人);重组人胰岛素;Cy5.5-Humhai recombinhait Insulin

Biotin -胰岛素(猪);猪胰岛素;Biotin -INSULIN

HRP -乙酰化低密度脂蛋白(人) ;HRP – Humhai Ac-LDL, AcLDL

Biotin -鱼精蛋白硫酸盐来源于鲑鱼;Biotin -Protamine sulfate from Salmom

HRP标记粘蛋白;HRP -Mucin from bovine submaxillary glhaids

Biotin-重组蛋白G琼脂糖凝胶;Biotin -FF rProtein G Sepharose

HRP -猪IgG干粉,猪免疫球蛋白;HRP -IgG from pig serum

Cy5-组蛋白,from Calf Thymus(冻干); Cy5- Histone from Calf Thymus(Lyophilized)

荧光染色聚苯乙烯微珠/球的稳定性-在线

荧光染色聚苯乙烯微珠/球的稳定性

荧光编码微球

微球是内部具有两种或三种精准荧光染料配比的染色聚苯乙烯微珠。

平台仪器以及其适配的软件,透过分析微球被光激发后发射出的独特光谱特征,可对实验管中各种微球进行识别。

荧光染色聚苯乙烯微珠/球的稳定性-在线

通过不同荧光染料配比,获取 500 种编码的微球

荧光稳定性

微球带有荧光染色,操作与保存好都在避光条件下,避免发生光漂白。

光漂白的微球因荧光强度改变,在光谱图上漂移出正确区域外,会致使数据无法有效判读。

微球约在曝光 2 个小时后开始漂白,并将在 4 个小时内完全漂白。由于这个时间是在微球的整个生命周期中持续累积计算,所以可以开灯进行实验,但是要速战速决,避免不必要的延时光照影响微球荧光稳定性。

荧光染色聚苯乙烯微珠/球的稳定性-在线

发生光漂白的微球,在光谱图上往右下方偏移

偶联稳定性

经偶联后的微球,其稳定性取决于许多因素,包括固定在微球面的蛋白/核酸、缓冲液成分、无菌状态和其他存储的条件。而除了以液体的状态保存外,偶联后的微球也可以冻干状态保存。

在良好的储放状态下,偶联后的微球可以保持稳定超过一年。从文献上也能找到针对偶联蛋白或是核酸后的微球进行稳定性测试的结果[2-5]

偶联抗体

以抗抗体及样本验证抗体偶联微球的稳定性,Y 轴刻度代表 MFI 值,X 轴表示抗抗体/样本的使用量。保存 18 个月后的微球,在偶联验证及功能性验证中,所获取的 MFI 值并无显著改变(Luminex internal study)

荧光染色聚苯乙烯微珠/球的稳定性-在线

偶联抗原

以血浆样本验证 9 重测定法中抗原偶联微球的稳定性,Y 轴刻度代表 MFI 值,X 轴表示微球状态。九种保存 18 个月后的微球(),与对应的新鲜偶联微球()相比,MFI 值具高度一致性.

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温度稳定性

常见的疑问是冷冻保存是不是能延长微球的有效期

冷冻微球并无法达到延长保质期的作用,微球的有效期仍然是以瓶身标示为准。三次以上的冻融循环会对微球造成损伤,应避免将微球冷冻保存; 如需冷冻保存,请勿放置于无霜冰箱,且建议分装多管,避免温度波动以及反覆冻融损伤微球。