GoldBio D-荧光素钾盐体内使用手册

荧光素是一种常见的生物发光报告子，用于体外成萤光素酶。这种萤火虫萤光素酶的水溶性底物（通常来自Photinuspyralis）

利用ATP和Mg2+作为共因子在氧气的存在。通过ATP的利用，反应可以进一步用于指示能量或生命的存在是为了起到生死攸关

的污点的作用。

萤火虫萤光素酶是研究基因最chang用的报告基因之一表达由于其ji端的敏感性，以及快速，易于使用的系统。萤光素酶用于监测

细菌、培养细胞以及转基因植物或动物。它是一种约61kDa的蛋白质，作为单体具有活性，不需要加工其活动。萤火虫萤光素

酶通过催化荧光素的氧化羧化作用产生具有任何已知生物发光中最gao效率之一的反应。萤光素活性可以通过与启动子/增强子的

相关性来表征基因调控元素。优化后化学发光反应和调节元件的转录活性。

本手册旨在介绍一种简单、经济、可靠的方法，用于在体外报告系统中检测荧光素酶活性。

生物发光反应：

几个因素可能会影响反应的灵敏度，包括温度、pH或底物浓度我们建议使用pH为7.8的缓冲液，并在使用前将所有试剂预热至

室温，以获得最佳结果。GoldBio还建议添加在测定缓冲液中过量的ATP和Mg2+用于更好的反应。

当荧光素被添加到萤光素酶样品中时，会立即产生闪光在0.3-0.5秒内达到峰值强度。然后，光线开始迅速衰减一半寿命约为0.5

-1.0分钟。但当辅酶A最初加入测定缓冲液时能够防止快速反应衰变延长了反应2-5分钟。如果稍后添加到反应中混合物，辅酶A也促进额外的二次闪光。

Gold Bio推荐基于Yuichi Oba等人（2003）：

-100mM Tris-HCl（pH 7.8）

-5mM MgCl2

-250μM CoA

-150μM ATP（Fraga，2008）

-150μg/mL d-荧光素（GoldBio）

一些研究人员还添加了二硫苏糖醇（DTT）或EDTA等成分（Steghans，1998）。您可以调整您的特定分析缓冲液以达到最佳

效果满足您的需求。我们建议对您的特定细胞进行动力学曲线的初步测试以获得最佳效果。

GoldBio  D-荧光素钾盐体内使用手册提供者——上海金畔生物科技有限公司：

一、辐射五大服务方向：

  1.国内试剂耗材经销代理；

  2.国外试剂订购（直订，或境外代理）；

  3.基因组测序（二代，二代+三代）；

  4.基因分型（SNP检测）：低/中/中 高通量项目；

  5.生物样本运输（国内、）；

二、多家代理品牌，涉及30多种较有名品牌，经营代理500多个品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology  、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

  所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷门品牌，均能给客户购买到。价格优，货期短，可加急，快10天到货；保证服务质量，所有产品均提供售后服务。大部分客户我们提供货到付款服务，

  公司自成立依靠过硬的服务和良好的信誉与各大企事业单位、科研单位建立长期合作。客户包括北大，清华，地大，中科院各所，各大药企等等。

  专业订购国内外试剂耗材，常备现货，一手货源，欢迎合作。

GoldBio D-荧光素钾盐使用说明书

一、GoldBio荧光素原液（GLSS）的制备

1.在分子生物学级H2O中制备15 mg/mL（100X）GLSS。

a.为了获得最佳结果，应立即使用GLSS，但可能会将其分离分成小份，在-80°C下储存长达1个月。

2.萤光素酶发光中萤光素底物GLSS的最终浓度

含量测定应为：150μg/ml（荧光素-K为471μM，荧光素Na为468μM）。

二、GoldBio萤光素酶测定缓冲液（TMCA）的制备

在合并到TMCA中之前，将所有试剂作为分子级H2O中的储备溶液进行制备。

1.准备一份500mM的MgCl2（100x）溶液。

a.称取476.05 mg（95.21 g/mol）MgCl2并溶解在10 ml H2O中。

b.溶液可储存在RT。

2.制备25mM CoA（100x）溶液。

a.称取191.88 mg（767.53 g/mol）CoA并溶解在10 ml H2O中。

b.通过过滤器抽取5-10 ml H2O，制备0.2µm过滤器。

c.通过预湿过滤器对100x CoA进行灭菌，并在-20°c下储存。

3.制备15mM ATP（100x）溶液。

a.称取82.67 mg（551.14 g/mol）ATP并溶解在10 ml H2O中。

b.在-20°C下储存。

4.制备400mM Tris-HCl，pH 7.8（4x）缓冲液。

a.称取4.85 g（121.14 g/mol）Tris碱并溶解在85 ml H2O中。

b.用1M HCl调节pH至pH 7.8，并用H2O将体积调至100 ml。

5.在室温下准备新鲜的2倍TMCA原料。

a.计算实验所需的TMCA；将所有组件合并为2倍

工作浓度（在H2O中）（随后在荧光素酶测定中降低到1x）。

示例：对于1 ml TMCA（2x）：500µl Tris-HCl（4x原液）20µl MgCl2（100倍库存） 20µl CoA（100倍库存）

20µl ATP（100倍库存）用H2O将体积调至1 ml。

b.如有必要，您可以在此时加入其他成分（即DTT、EDTA）。

更多有关GoldBio  D-荧光素钾盐使用说明书，请联系上海金畔客服！

GoldBio  D-荧光素钾盐使用说明书提供者——上海金畔生物科技有限公司：

一、辐射五大服务方向：

  1.国内试剂耗材经销代理；

  2.国外试剂订购（直订，或境外代理）；

  3.基因组测序（二代，二代+三代）；

  4.基因分型（SNP检测）：低/中/中 高通量项目；

  5.生物样本运输（国内、）；

二、多家代理品牌，涉及30多种较有名品牌，经营代理500多个品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology  、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

  所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷门品牌，均能给客户购买到。价格优，货期短，可加急，快10天到货；保证服务质量，所有产品均提供售后服务。大部分客户我们提供货到付款服务，

  公司自成立依靠过硬的服务和良好的信誉与各大企事业单位、科研单位建立长期合作。客户包括北大，清华，地大，中科院各所，各大药企等等。

  专业订购国内外试剂耗材，常备现货，一手货源，欢迎合作。

GoldBio D-荧光素钾盐的介绍

GoldBio提供1500多种分子生物学级产品，同时具有一个活跃的分子生物学研究与发展计划，旨在为您的研究开发新产品。其中，

D-荧光素钾在整个生物技术领域都有广泛的应用,特别是在体内活体成像技术中应用较为广泛。荧光素是一种常见的生物发光

报告基因，用于荧光素酶表达的体内成像。萤火虫萤光素酶的这种水溶性底物利用ATP和Mg2+作为辅因子，在氧气存在的情

况下发出特征性的黄绿色发射，在37°C的体内转变为红光。通过ATP的利用，该反应可以进一步用于指示能量或生命的存在，

从而起到生死染色的作用。

荧光素是一种常见的试剂，用于整个生物技术领域，特别是体内成像。萤光素酶标记的肿瘤细胞、干细胞或传染病通常被接种到

研究动物如大鼠或小鼠中进行研究。荧光素的注射允许通过生物发光成像（BLI）实时、无创地监测这些模型系统中的疾病进展和

/或药物疗效。

荧光素也常用于体外研究，包括萤光素酶和ATP测定、基因报告基因测定、高通量测序和各种污染测定。

GoldBio D-荧光素钾盐的产品细节：

化学名称：4,5-二氢-2-（6-羟基-2-苯并噻唑基）-4-噻唑羧酸钾盐；

纯度：分子生物学级（高级纯）；

化学式：C11H7N2O3S2K；

分子量：318.42 g/mol；

颜色：浅黄色粉末；

纯度：纯度>99%；

储存：在-20°C下干燥储存。避光。

更多GoldBio D-荧光素钾盐的介绍，请联系上海金畔客服！

GoldBio D-荧光素钾盐代理——上海金畔生物科技有限公司：

一、辐射五大服务方向：

  1.国内试剂耗材经销代理；

  2.国外试剂订购（直订，或境外代理）；

  3.基因组测序（二代，二代+三代）；

  4.基因分型（SNP检测）：低/中/中 高通量项目；

  5.生物样本运输（国内、）；

二、多家代理品牌，涉及30多种较有名品牌，经营代理500多个品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology  、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

  所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷门品牌，均能给客户购买到。价格优，货期短，可加急，快10天到货；保证服务质量，所有产品均提供售后服务。大部分客户我们提供货到付款服务，

  公司自成立依靠过硬的服务和良好的信誉与各大企事业单位、科研单位建立长期合作。客户包括北大，清华，地大，中科院各所，各大药企等等。

  专业订购国内外试剂耗材，常备现货，一手货源，欢迎合作。