Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒怎么用？
Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其它相关生物液体中FA/VB9浓度。那么你知道Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒怎么用吗？让我们一起来看看吧！
一、检测前准备工作
1. 提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(18-25℃)。如果试剂盒需分 多次使用，请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂，剩余板条和试剂需 按照zhi定条件保存。
2. 洗涤液：将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:24)。提示：从冰箱中取出的浓缩洗 涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶wan全溶解后 再配制洗涤液。当日使用。
3. 标准品工作液：将标准品于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1 mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，轻轻混匀，避免起泡，配成100 ng/mL的标准品工作液(或加入1mL标准品&样品稀释液后，静置1-2分钟，用低速涡旋仪充分混匀。可通过低速离心去除涡旋过程中产生的气泡)。然后根据需要进行倍比稀释。建议配制 成以下浓度：100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0 ng/mL。倍比稀释方法：取7支EP管，每管中加入500 μL标准品&样品稀释液，从100 ng/mL的标准品工作液中吸取500 μL到第一支EP管中混匀配成50 ng/mL的标准品工作液，按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。提示：最后一管直接作为空白孔，不需要再从倒数第二管中吸取液体。倍比稀释的标准品工作液需要现配现用。
4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以50 μL/孔计算)，实 际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟，将浓缩生物素化抗体于 800×g离心1分钟，以生物素化抗体稀释液将100×浓缩生物素化抗体稀释成 1×工作浓度(例如：10 μL浓缩液+990 μL稀释液)。现配现用。
5. HRP酶结合物工作液：HRP酶结合物为HRP酶结合亲和素。实验前计算当次实验所需用量(以100 μL/孔计算)，实际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟，将浓缩HRP酶结合物于800×g离1分钟，以酶结合物稀释液将100×浓缩HRP酶结合物稀释成1×工作浓度(例如：10 μL浓缩液+990 μL稀释液)。现配现用。
二、操作步骤：
1. 分别设定标准孔、空白孔和样本孔。标准孔加入50 μL 倍比稀释的标准品，空白孔加入50μL标准品&样本稀释液，其余孔加入50 μL 待测样本(建议所有的待检样本和标准品在检测中设立复孔；建议通过预实验或咨询技术 支持确定待检样本的稀释倍数)。立即每孔加入配好的生物素化抗体工作液50 μL。给酶标板覆膜，37℃孵育45分钟。提示：加样时将样品加于酶 标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。
2. 甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干。每孔加洗涤液350 μL，浸泡1分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可使用洗板机。洗板完成后请立即进行下步操作，不要让微孔板干燥。
3. 每孔加 HRP 酶结合物工作液100 μL，酶标板加上覆膜，37℃温育30分钟。 4. 甩尽孔内液体，洗板5次，方法同步骤 2。
5. 每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，酶标板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时(前4个显色孔出现明显蓝色梯度)，即可终止。提前15分钟打开酶标仪预热。
6. 每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
7. 立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD 值)。
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