Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒怎么用？

Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其它相关生物液体中FA/VB9浓度。那么你知道Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒怎么用吗？让我们一起来看看吧！

一、检测前准备工作

1. 提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(18-25℃)。如果试剂盒需分 多次使用，请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂，剩余板条和试剂需 按照zhi定条件保存。

2. 洗涤液：将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:24)。提示：从冰箱中取出的浓缩洗 涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶wan全溶解后 再配制洗涤液。当日使用。

3. 标准品工作液：将标准品于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1 mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，轻轻混匀，避免起泡，配成100 ng/mL的标准品工作液(或加入1mL标准品&样品稀释液后，静置1-2分钟，用低速涡旋仪充分混匀。可通过低速离心去除涡旋过程中产生的气泡)。然后根据需要进行倍比稀释。建议配制 成以下浓度：100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0 ng/mL。倍比稀释方法：取7支EP管，每管中加入500 μL标准品&样品稀释液，从100 ng/mL的标准品工作液中吸取500 μL到第一支EP管中混匀配成50 ng/mL的标准品工作液，按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。提示：最后一管直接作为空白孔，不需要再从倒数第二管中吸取液体。倍比稀释的标准品工作液需要现配现用。

4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以50 μL/孔计算)，实 际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟，将浓缩生物素化抗体于 800×g离心1分钟，以生物素化抗体稀释液将100×浓缩生物素化抗体稀释成 1×工作浓度(例如：10 μL浓缩液+990 μL稀释液)。现配现用。

5. HRP酶结合物工作液：HRP酶结合物为HRP酶结合亲和素。实验前计算当次实验所需用量(以100 μL/孔计算)，实际配制时应多配制100-200 μL。使用前15分钟，将浓缩HRP酶结合物于800×g离1分钟，以酶结合物稀释液将100×浓缩HRP酶结合物稀释成1×工作浓度(例如：10 μL浓缩液+990 μL稀释液)。现配现用。

二、操作步骤：

1. 分别设定标准孔、空白孔和样本孔。标准孔加入50 μL 倍比稀释的标准品，空白孔加入50μL标准品&样本稀释液，其余孔加入50 μL 待测样本(建议所有的待检样本和标准品在检测中设立复孔；建议通过预实验或咨询技术 支持确定待检样本的稀释倍数)。立即每孔加入配好的生物素化抗体工作液50 μL。给酶标板覆膜，37℃孵育45分钟。提示：加样时将样品加于酶 标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。

2. 甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干。每孔加洗涤液350 μL，浸泡1分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可使用洗板机。洗板完成后请立即进行下步操作，不要让微孔板干燥。

3. 每孔加 HRP 酶结合物工作液100 μL，酶标板加上覆膜，37℃温育30分钟。 4. 甩尽孔内液体，洗板5次，方法同步骤 2。

5. 每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，酶标板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时(前4个显色孔出现明显蓝色梯度)，即可终止。提前15分钟打开酶标仪预热。

6. 每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

7. 立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD 值)。

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Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒的原理与注意事项有什么？

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一、检测原理

Elabscience叶酸/维生素B9(FA/VB9)ELISA试剂盒采用竞争ELISA法。用 FA/VB9 抗原包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的 FA/VB9与包被的FA/VB9 竞争生物素标记的抗 FA/VB9 单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，FA/VB9 浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中 FA/VB9 的浓度。

二、注意事项

1) 收集血液的试管应为一次性无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品。

2) 样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

3) 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。

4) 若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

5) 若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

6) 某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

7) 试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。

8) 请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。未用完的浓缩生物素化抗体(100×)、浓缩HRP酶结合物(100×)、酶标板及其他原液按照上述表格中保存条件存放。

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