如何处理PCR反应中的污染?

如何处理PCR反应中的污染?

PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。那么我们该如何处理PCR反应中的污染呢?让我们一起来看看吧!

一、环境污染

1.稀酸处理法:对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡,使残余DNA脱嘌呤。

2.紫外照射(UV)法:紫外波长(nm)一般选择254/300nm,照射30min即可。需要注意的是,选择UV作为消除残留PCR产物污染时,要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布,UV照射仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大。UV照射时,PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体,这些二聚体可使延伸终止,但并不是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体,且UV照射还可使二聚体断裂。形成二聚体的程度取决于UV波长,嘧啶二聚体的类型及与二聚体位点相邻核苷酸的序列。

在受照射的长DNA链上,形成二聚体缺陷的数量少于0.065/碱基,其他非二聚体的光照损伤(如环丁烷型嘧啶复合体,胸腺嘧啶乙二醇,DNA链间与链内的交联和DNA断裂等)均可终止Taq DNA聚合酶的延伸。这些位点的数量与二聚体位点相当。如果这些位点(0.13/碱基)在DNA分子上随机分布,一个500bp片段的DNA分子链上将有32处损伤位点,那么,105个这样的分子中每个分子中会至少有一处损伤。相反,如果100bp的片段,每条链上仅有6处损伤,105个拷贝分子中将有许多分子没有任何损伤。这就是UV照射有一定的片段长度限制的原因。

二、反应液污染

1.DNase I法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30 min后加热灭活,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列。

2.内切酶法:选择识别4个碱基的内切酶(如Msp I和Taq I等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h 后加热灭活进行PCR。

3.紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射,注意事项与方法同上述UV照射法。

4.g射线辐射法:1.5kGy的辐射可wan全破坏0.1ng基因组DNA,2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子,4.0 kGy仍不影响PCR,但高于此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR,g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。

三、RS-PCR法(RNA-specific PCR)

也称为链特异性PCR,主要指用于RNA模板的特异性PCR法,该法可明显降低假阳性而不影响PCR的敏感性。其关键在于设计引物,逆转录引物的3ˊ端(A区)有2 0个核苷酸左右为模板的特异性互不序列,5ˊ端2 0个核苷酸(C区)为附加修饰碱基。与mRNA逆转录后,经超速离心使 cDNA与多余引物分开,再用和第二引物(C)以第一链cDNA为模板合成第二链cDNA,以后的PCR循环中用逆转录引物的B区和引物C进行扩增加尾cDNA,而污染的DNA或质粒DNA才不会被扩增。

四、抗污染引物法

该对引物扩增时通过病毒DNA克隆如入质粒的位点。这一区域只存在完整的原病毒中,在重组质粒中,这一区域分成两个区域与克隆位点被。如果重组质粒污染了标本,也不能扩增出任何条带,即使出现了扩增带,其大小也与预期的不同。只有原病毒DNA才能被引物扩增,因此只要出现预期大小的扩增带就可以证明标本是阳性的,该法试用于环状靶分子系列。

更多有关如何处理PCR反应污染的问题,请联系上海金畔生物科技有限公司:

细胞的处理与采集方法是什么?

细胞的处理与采集方法是什么?

采集方法和处理是获取细胞来源后的关键步骤,它们直接影响到细胞的质量和活力。那么你知道细胞的处理与采集方法是什么吗?让我们一起来看看吧!

一、采集方法:

1.骨髓穿刺:通过骨髓穿刺针将针头插入骨髓腔,通常在骨盆骨骼或胸骨等部位进行。这种方法适用于骨髓来源的细胞,如造血干细胞。

2.外周血采集:通过外周静脉或动脉采集患者的整个血液。这种方法适用于外周血来源的细胞,如外周血造血干细胞。

3.脂肪抽取:通过脂肪组织的吸取来获取脂肪来源的细胞,如脂肪干细胞。这种方法通常使用吸脂器来抽取脂肪组织。

4.细胞培养:一些细胞需要事*行细胞培养才能获取足够数量的细胞。这包括胚胎干细胞、诱导多能干细胞等。

二、采集后的处理:

1.细胞处理:采集的组织或血液可能包含其他非细胞成分,如细胞碎片、血液成分等,在处理前需要进行去除或分离。这可以通过离心、过滤、沉淀等方法进行。

2.细胞浓缩:有时,在采集的细胞含量较低或稀释的情况下,需要进行细胞浓缩来提高细胞数目。浓缩方法包括离心浓缩、过滤浓缩、离心膜过滤等。

3.细胞存活与损伤:细胞采集和处理过程中可能会导致细胞存活率下降或细胞损伤。因此,在采集和处理过程中需要采取适当的措施来保护细胞的存活和完整性,如控制温度、使用适当的缓冲液等。

在采集和处理过程中,应严格遵守相关的操作规范和卫生要求,确保细胞的质量和安全性。同时,根据不同的细胞来源和处理方法,需制定相应的实验方案和处理步骤,确保细胞采集和处理的有效性和可靠性。更多有关细胞的采集方法与处理问题,请联系上海金畔生物科技有限公司:

血清使用常见问题,如何处理?

血清使用常见问题,如何处理?

购买血清后,在使用的过程中,会遇到这样那样的问题,如何处理呢?让我们一起来看看吧!

一、血清保存的最好方法?

建议血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶,建议无菌分装于适当的灭菌容器内冷冻备用。

二、如何解冻血清,才能保证其质量不会受损?

议将血清从冷冻箱取出后,置于2℃~8℃冰箱中解冻,然后在室温下全融,解冻过程中必须规则地摇晃均匀。

三、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀?应该怎样处理?

血清中絮状沉淀产生的原因有很多,其中最pu遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)。在血清解冻后,也会存在于血清中,这也是造成沉淀的主要原因,但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀,可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中,2000~3000rpm离心5min。一般不建议用过滤的方法去除絮状沉淀,因为沉淀会阻塞滤膜,造成过滤困难或无法过滤。

四、为什么要热灭活血清?有必要热灭活吗?

加热可以灭活血清中的补体系统,使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞,同时还能够参与溶解细胞的过程。

诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活;而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中,推荐使用热灭活血清。实验显示,经正确热灭活处理的血清,对细胞的生长只有微小的促进或wan全没有促进作用,而通常因为高温处理影响了血清的质量,造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清,沉淀物明显增多,倒置显微镜下观察呈“小黑点”,往往会使研究者误以为是血清受到了污染,而把血清放于37℃中,沉淀物又会更增多,有会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此我们建议若非必须,可以不进行热处理,既节省时间又确保质量。

五、如何避免沉淀物的产生?

建议您在血清使用的过程中,采用正确的解冻方法(冷冻→4℃→室温),若血清解冻时改变的温度太大(如冷冻→37℃)非常容易产生沉淀物。温度过高、时间过久、摇晃不均匀等,都会造成沉淀增多,建议如非必要无须对血清进行灭活;若必须热灭活,应严格遵守56℃,30min的原则,并随时摇晃均匀。

更多有关血清使用常见问题的介绍,请联系胎牛血清供应商——上海金畔生物科技有限公司:

冻存细胞后续如何处理?

冻存细胞后续如何处理?

冻存细胞在收到货后,后续如何进行处理呢?如何复苏呢?一文让你了解清楚!

一、收到冻存细胞如何处理

收到冻存细胞后,请打开包装箱,检查箱内干冰是否充足,冻存管是否融化,若已经融化,请拍照留存,并联系客服,若无异常,请及时将冻存管置于超低温冰箱内保存,若长时间不使用,必须在超低温冰箱内过夜后转移至液氮中保存。

二、冻存细胞如何复苏

取100mm培养皿并做好标记,加入预热好的12ml完quan培养基,将冻存管放入37℃水浴锅中,轻轻摇晃冻存管,待细胞悬液完quan溶解后,转移至安全柜中操作。用无菌吸管吸取溶解液至培养皿中,顺时针摇匀,在显微镜下观察细胞状态并记录,放入二氧化碳细胞培养箱中培养,18h后更换完quan培养基。

更多有关冻存细胞后续如何处理的问题,请联系AcceGen细胞代理商——上海金畔生物科技有限公司:

美国新生牛血清,射线处理

上海金畔生物科技有限公司提供美国新生牛血清,射线处理 ,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
美国新生牛血清,射线处理

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美国新生牛血清,射线处理

产品名称:HyClone™ Newborn Bovine Calf Serum, US Origin, 1000 mL, Irradiated 25-40kGy ;美国新生牛血清,射线处理

产品货号:SH30118.04IR30-45;

处理方式:3×100 nm滤膜过滤;

地区来源:美国;

物种来源:出生天数小于10天的新生牛;

内毒素水平:内毒素水平:≤ 50 EU/mL;

血红素水平:< 30 mg/dL

热灭活:未灭活;

射线处理:处理;

保存条件:≤-10℃;

运输方式:干冰运输;

详细介绍:Bovine calf serum products are excellent and cost-effective alternatives to fetal bovine serum (FBS). Bovine calf serum products contain exceptionally high levels of transferrin, which can provide three to four times as much available iron as FBS.


Key features of HyClone™ Newborn Bovine Calf Serum include:


Complete traceability back to original source.

Low in antibodies and high in growth factors.

Virus panel testing according to 9 CFR 113.53.

HyClone™ Newborn Bovine Calf Serum, US Origin undergoes the same careful collection and processing procedures (including venipuncture) used for our bovine serum products. Newborn calf serum is sourced from animals that are typically less than 10 days old and filtered through three sequential 100 nm (0.1 μm) pore sized-rated filters.

射线处理,热灭活,新生牛血清

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射线处理,热灭活,新生牛血清

详情介绍

射线处理,热灭活,新生牛血清

产品名称: HyClone Newborn Bovine Calf Serum, NZ Origin, 500 mL, Irradiated 25-40kGy, Heat-inactivated;射线处理,热灭活,新生牛血清

产品货号:SH30401.01IH25-40;

处理方式:3×100 nm滤膜过滤;

地区来源:新西兰;

物种来源:出生天数小于10天的新生牛;

内毒素水平:内毒素水平:≤ 25 EU/mL;

血红素水平:< 30 mg/dL

热灭活:灭活;

射线处理:处理;

保存条件:≤-10℃;

运输方式:干冰运输;

详细介绍:A cost-effective alternative to Fetal Bovine Serum (FBS).


Sourced from New Zealand with complete traceability back to original source.

Age of animal at time of collection less than 10 days old.

Low in antibodies and high in growth factors.

Virus panel testing according to 9 CFR 113.53.

All New Zealand calf serum products are carefully collected, processed, and filtered in New Zealand to ensure safety against bovine diseases. We follow the same standards in processing of our calf serum as with our Fetal Bovine Serum (FBS) to enable offering the highest quality and traceability.


New Zealand Newborn Bovine Calf Serum is filtered through sequential 100 nm (0.1 µm) pore size-rated filters. Before dispensing, each lot of serum is pooled using true pool technology to ensure uniformity and consistency between bottles.

HyClone射线处理新生牛血清

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HyClone射线处理新生牛血清

详情介绍

HyClone射线处理新生牛血清

产品名称:HyClone Newborn Bovine Calf Serum, NZ Origin, 1000 mL, Irraddiated 25-40kGy;HyClone射线处理新生牛血清

产品货号:SH30401.02IR25-40;

处理方式:3×100 nm滤膜过滤;

地区来源:新西兰;

物种来源:出生天数小于10天的新生牛;

内毒素水平:内毒素水平:≤ 25 EU/mL;

血红素水平:< 30 mg/dL

热灭活:未灭活;

射线处理:处理;

保存条件:≤-10℃;

运输方式:干冰运输;

详细介绍:A cost-effective alternative to Fetal Bovine Serum (FBS).


Sourced from New Zealand with complete traceability back to original source.

Age of animal at time of collection less than 10 days old.

Low in antibodies and high in growth factors.

Virus panel testing according to 9 CFR 113.53.

All New Zealand calf serum products are carefully collected, processed, and filtered in New Zealand to ensure safety against bovine diseases. We follow the same standards in processing of our calf serum as with our Fetal Bovine Serum (FBS) to enable offering the highest quality and traceability.


New Zealand Newborn Bovine Calf Serum is filtered through sequential 100 nm (0.1 µm) pore size-rated filters. Before dispensing, each lot of serum is pooled using true pool technology to ensure uniformity and consistency between bottles.

新西兰射线处理新生牛血清

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新西兰射线处理新生牛血清

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新西兰射线处理新生牛血清

产品名称:HyClone Iron-Supplemented Newborn Bovine Calf Serum, NZ Origin, 1000 mL, Irradiated 25-40kGy;新西兰射线处理新生牛血清

产品货号:SH30626.03IR25-40;

处理方式:3×100 nm滤膜过滤;

地区来源:新西兰;

物种来源:出生天数小于10天的新生牛;

内毒素水平:内毒素水平:≤ 25 EU/mL;

血红素水平:< 30 mg/dL

热灭活:未灭活;

射线处理:处理;

保存条件:≤-10℃;

运输方式:干冰运输;

详细介绍:A cost-effective alternative to Fetal Bovine Serum (FBS).


Sourced from New Zealand with complete traceability back to original source.

Age of animal at time of collection less than 10 days old.

Low in antibodies and high in growth factors.

Virus panel testing according to 9 CFR 113.53.

Supplemented with iron.

All New Zealand calf serum products are carefully collected, processed, and filtered in New Zealand to ensure safety against bovine diseases. We follow the same standards in processing of our calf serum as with our Fetal Bovine Serum (FBS) to enable offering the highest quality and traceability.


Iron-supplemented New Zealand Newborn Bovine Calf Serum is filtered through sequential 100 nm (0.1 µm) pore size-rated filters. Before dispensing, each lot of serum is pooled using true pool technology to ensure uniformity and consistency between bottles.

100mm细胞培养皿,等离子处理

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100mm细胞培养皿,等离子处理

详情介绍

产品名称:100mm细胞培养皿,等离子处理

产品品牌:BBSP;

产品货号:BC6100;

产品规格:10个/包,30包/箱;

产品包装:箱;

产品介绍:

BBSP细胞培养系列耗材是细胞培养实验室的常规工具,采用等离子表面处理技术,更加有益于细胞贴壁生长,广泛应用于生命科学基础研究、肿瘤研究、病毒检测与诊断,基因工程及疫苗研发生产等领域。

T175细胞培养瓶,透气盖,等离子处理

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T175细胞培养瓶,透气盖,等离子处理

详情介绍

产品名称:T175细胞培养瓶,透气盖,等离子处理

产品品牌:BBSP;

产品货号:BC6175;

产品规格:5个/包,10包/箱;

产品包装:箱;

产品介绍:

BBSP细胞培养系列耗材是细胞培养实验室的常规工具,采用等离子表面处理技术,更加有益于细胞贴壁生长,广泛应用于生命科学基础研究、肿瘤研究、病毒检测与诊断,基因工程及疫苗研发生产等领域。