胎牛血清如何解冻

胎牛血清如何解冻

胎牛血清在生物医学研究，以及细胞培养领域中，应用广泛。胎牛血清含有丰富的生长因子、蛋白质和其他生物分子，对细胞生长和增殖具有重要作用。使用胎牛血清，先要将其解冻融化。融化胎牛血清时采取正确的方法非常重要，不正确的解冻过程可能会导致损坏或降低血清的有效性，影响到实验的可重复性和准确性。那么你知道胎牛血清该如何解冻吗？让我们一起来看看吧！

一、解冻方法

胎牛血清中珍贵的生长因子等活性物质，它们在解冻过程中，有着与细胞复苏类似的经历，都需要快速解冻才能最da程度地保留生物活性。

4℃过夜这样的长时间处理，很有可能会导致一部分的损失，影响细胞生长，为了更好地保留胎牛血清中的活性成分，使细胞培养更稳定，我们推荐使用三步法解冻胎牛血清。

 如果是储存在-80℃的胎牛血清，则需提前几天先转移至-20℃冰箱中（至少24小时），再使用三步法溶解，避免温差过大使血清失活。

彻di解冻胎牛血清后，可以根据实验需求，将其分装，保证每一份够一次使用量即可，比如：25ml/管、50ml/管等。密封好后赶紧放回-20℃冰箱继续储存。需要配制培养基的时候，再从-20℃冰箱中取出一管来解冻使用，可以有效避免反复冻融的问题（遵循现用现配、现配现解冻的原则）。配好的培养基可以放到4℃冰箱进行储存。

二、常见问题

1. 胎牛血清有絮状沉淀：

把血清置于37℃中过久，或者没有阶梯解冻，还有解冻水浴时振荡不足导致局部温差过大等原因，都会使血清产生一些沉淀。

正确的处理方法：可以等待其自然沉降，然后取上清液使用。若比较急用、或者絮状沉淀过于分散以至于无法取上清，可以2000～3000rpm离心5min。不推荐使用过滤法，血清的蛋白容易导致滤膜堵塞。热灭活之后的血清更容易产生沉淀。

2. 热灭活？血清热灭活是什么，有必要热灭活吗？

血清热灭活主要是为了除去对热敏感的补体。

补体是广泛存在于人和脊椎动物体血清及组织液中，不耐热，活化后具有酶活性、可介导免疫应答和炎症反应的一类蛋白质。补体的作用包括但不限于调理吞噬、裂解细胞、介导炎症、免疫调节和清除免疫复合物等。但由于胎牛胎龄8个月以下，尚未形成完善的补体系统，对免疫实验的影响较小，而热灭活血清反而会使血清中的很多重要微量生长因子分解流失，因此大部分实验不推荐热灭活血清。

更多有关胎牛血清如何解冻的问题，请联系上海金畔生物科技有限公司。

如何避免细胞污染？

如何配置1640培养基？

RPMI 1640培养基最初是为淋巴细胞培养专门设计的，现被发现适用于多种哺乳动物细胞，包括 HeLa 细胞、Jurkat 细胞、 MCF-7 细胞、PC12 细胞、PBMC 细胞、星形胶质细胞和癌细胞等。那么你知道该如何配置1640培养基吗？让我们一起来看看吧！

一、材料

1. 1640培养基粉末

2. 纯水

3. 无菌量筒或烧杯

4. pH试纸或pH计

5. 无菌培养瓶或离心管

6. 无菌滤器

二、步骤

1. 准备工作区域：确保实验室台面清洁，并使用消毒剂将台面消毒。

2. 洗手：che底洗手，并戴上实验手套。

3. 准备无菌器具：将无菌培养瓶或离心管、无菌滤器放入高压灭菌器中，按照厂商说明进行高压灭菌。

4. 准备1640培养基：根据需求量，称取适量的1640培养基粉末，放入无菌量筒或烧杯中。

5. 加入纯水：使用纯水，缓慢加入1640培养基粉末中，同时搅拌，直到溶解wan全，形成均匀的液体。

6. 调节pH值：使用pH试纸或pH计，检测培养基的pH值。如果需要调节pH值，可以加入少量的NaHCO3或NaOH（用于提高pH）或HCl（用于降低pH），并逐渐调节至目标pH值。

7. 过滤培养基：将调节好pH值的培养基通过无菌滤器过滤，以去除其中的微生物和杂质。

8. 分装培养基：将过滤好的培养基分装到已经高压灭菌的无菌培养瓶或离心管中，每个容器装满后紧密封闭。

9. 高压灭菌：将分装好的培养基放入高压灭菌器中，按照厂商说明进行高压灭菌，以确保培养基的无菌性。

10. 存储：将高压灭菌后的培养基存放在冰箱中，以防止其变质。

更多有关1640培养基的配制方法，请联系上海金畔生物科技有限公司。

如何选择与优化细胞培养基？

培养基选择与优化是细胞培养的重要步骤之一，它直接影响到细胞的生长、增殖和功能表达。那么我们该如何选择与优化细胞培养基呢？让我们一起来看看吧！

一、培养基选择：

1.细胞类型：根据细胞的来源和种类选择合适的培养基。不同类型的细胞有着不同的营养需求和生长特性，因此需要选择能够满足其需求的培养基。常见的培养基有DMEM、RPMI 1640、MEM等。

2.营养需求：细胞通过培养基中的成分来获取所需的营养物质。根据细胞的需求，可以调整培养基的氨基酸、脂类、无机盐等成分的配比和浓度。

3.补充物质：培养基中可以添加一些补充物质来促进细胞生长和扩增，如生长因子、激素、细胞因子等。根据细胞类型和需要，选择并添加合适的补充物质。

4.细胞培养的特殊需求：某些细胞可能对某些特定条件有特殊的要求，比如干细胞可能需要特殊的细胞培养基配方，或者细胞需要在无血清条件下培养。在这种情况下，需要选择相应的特殊培养基。

二、培养基优化：

1.细胞传代选择：在细胞培养的过程中，可以根据细胞的特殊需求选择合适的细胞传代策略。有些细胞需要经常传代以保持其活力和生长状态，而有些细胞则不需要频繁传代。

2.培养条件优化：通过调整培养基中的成分和条件，如温度、pH值、二氧化碳浓度等，来优化细胞的生长环境和扩增效果。

3.细胞生长曲线监测：通过定期监测细胞的生长曲线，了解细胞的增殖速度和生长特性，从而根据需要调整培养条件和策略。

4.细胞分化控制：对于一些需要控制细胞分化状态的细胞类型，可以通过优化培养条件和添加特定因子来控制细胞的分化方向和程度。

培养基选择与优化是细胞培养和扩增的基础，通过合理的培养基选择和优化，可以提高细胞的生长速度、细胞数量和细胞功能稳定性。更多有关培养基的选择与优化问题，请联系上海金畔生物科技有限公司：

如何检测细胞凋零？

细胞凋亡是程序性细胞死亡的高度调控形式，在多细胞生物发育过程中、整个生命周期以及对细胞应激作出反应时均可发生细胞凋亡。核固缩、细胞皱缩、质膜出泡和 DNA 断裂是细胞凋亡的典型特征。那么你知道如何检测细胞凋零吗？让我们一起来看看吧！

一、对细胞悬浮液进行 Annexin V 染色后，通过流式细胞仪可以有效地识别细胞凋亡早期脂质双层的变化。但是，这种检测不太适合完整的组织标本，否则结果难以量化和解释。

二、其他细胞凋亡标记，如 Cleaved Caspase-3 和核酶多聚二磷酸腺苷核糖 (ADP-ribose) 聚合酶 (PARP)，更适合用传统的免疫组织化学方法在组织切片中检测。

三、使用 DNA 染料染色（例如 DAPI 和 Hoeschst 33342）来观察染色质凝聚。

四、使用末端脱氧核苷酸转移酶介导 dUTP 缺口末端标记法 (TUNEL) 检测以及其他亚细胞定位标记（包括 细胞色素 C 从线粒体到细胞质的转位）确定 DNA 链断裂和碎片裂解。

五、线粒体膜电位是细胞健康状态的关键指标，其损耗与非活性、功能失调的线粒体，因此，它是细胞凋亡的早期指标，可以在与细胞可渗透阳离子染料 TMRE（四甲基罗丹明乙酯）孵育后进行检测。TMRE 通常在健康完整线粒体中累积，因此，当线粒体膜电位被破坏时，荧光强度降低。

六、生长因子和细胞因子通过PI3K/Akt 途径诱导的信号转导会导致促凋亡的 Bcl-2 家族成员 Bad、Bax、caspase-9、GSK-3 和 FoxO1 的磷酸化和抑制，以及抗细胞凋亡蛋白如 Bcl-2 的上调。

更多有关细胞凋零的检测方法，请联系上海金畔生物科技有限公司：

细胞计数器是如何工作的呢？

细胞计数器是一种用于快速、准确计数细胞数量的实验仪器。它通常用于生物学、医学和生物工程等领域中的细胞培养、细胞分析和血液学研究等应用。那么细胞计数器是如何工作的呢？让我们一起来看看吧！

一、样本处理：

首先，需要将待计数的细胞样品进行适当的处理。通常，细胞会与染色剂和/或稀释液混合。染色剂可以帮助细胞在计数过程中更好地被检测和区分。

二、计数腔和光源：

细胞计数器通常包含计数腔和光源。计数腔是一个小空间，可以容纳样本溶液。光源通常是一束可见光或激光束，用于照射计数腔中的细胞。

三、光敏传感器：

细胞计数器配备一个光敏传感器，它可以感应到细胞在光源照射下发出的信号。光敏传感器的种类有很多，常见的包括光电管、光电二极管和光电多道器等。

四、信号检测和转化：

光敏传感器会检测到来自细胞的发射信号，该信号是由细胞与染色剂发生反应所产生的。这些信号可以是荧光、散射、吸收等形式。光敏传感器会将检测到的光信号转化为电信号。

五、信号处理和计数：

电信号进一步经过信号处理和放大等步骤，使得信号变得更加稳定和准确。计数器会根据电信号的强度和频率来确定细胞的数量，并将其显示在仪器的数字屏幕上。

细胞计数器的工作原理基于光学原理和电子技术，充分利用了细胞和染色剂对光的吸收、散射和发射等特性。通过光源的照射和光敏传感器对细胞产生的光信号的检测和转化，细胞计数器能够实现快速、准确地计数细胞数量。更多有关细胞计数器工作原理问题，请联系上海金畔生物科技有限公司：

血清使用常见问题，如何处理？

购买血清后，在使用的过程中，会遇到这样那样的问题，如何处理呢？让我们一起来看看吧！

一、血清保存的最好方法？

建议血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶，建议无菌分装于适当的灭菌容器内冷冻备用。

二、如何解冻血清，才能保证其质量不会受损？

建议将血清从冷冻箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解冻，然后在室温下全融，解冻过程中必须规则地摇晃均匀。

三、为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀？应该怎样处理？

血清中絮状沉淀产生的原因有很多，其中最pu遍的还是由于血清中脂蛋白的变性所致，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）。在血清解冻后，也会存在于血清中，这也是造成沉淀的主要原因，但这些絮状沉淀并不影响血清本身的质量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者将血清分装于无菌离心管中，2000～3000rpm离心5min。一般不建议用过滤的方法去除絮状沉淀，因为沉淀会阻塞滤膜，造成过滤困难或无法过滤。

四、为什么要热灭活血清？有必要热灭活吗？

加热可以灭活血清中的补体系统，使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞，同时还能够参与溶解细胞的过程。

诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活；而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中，推荐使用热灭活血清。实验显示，经正确热灭活处理的血清，对细胞的生长只有微小的促进或wan全没有促进作用，而通常因为高温处理影响了血清的质量，造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清，沉淀物明显增多，倒置显微镜下观察呈“小黑点”，往往会使研究者误以为是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又会更增多，有会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此我们建议若非必须，可以不进行热处理，既节省时间又确保质量。

五、如何避免沉淀物的产生？

建议您在血清使用的过程中，采用正确的解冻方法（冷冻→4℃→室温），若血清解冻时改变的温度太大（如冷冻→37℃）非常容易产生沉淀物。温度过高、时间过久、摇晃不均匀等，都会造成沉淀增多，建议如非必要无须对血清进行灭活；若必须热灭活，应严格遵守56℃，30min的原则，并随时摇晃均匀。

更多有关血清使用常见问题的介绍，请联系胎牛血清供应商——上海金畔生物科技有限公司：

冻存细胞后续如何处理？

冻存细胞在收到货后，后续如何进行处理呢？如何复苏呢？一文让你了解清楚！

一、收到冻存细胞如何处理

收到冻存细胞后，请打开包装箱，检查箱内干冰是否充足，冻存管是否融化，若已经融化，请拍照留存，并联系客服，若无异常，请及时将冻存管置于超低温冰箱内保存，若长时间不使用，必须在超低温冰箱内过夜后转移至液氮中保存。

二、冻存细胞如何复苏

取100mm培养皿并做好标记，加入预热好的12ml完quan培养基，将冻存管放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃冻存管，待细胞悬液完quan溶解后，转移至安全柜中操作。用无菌吸管吸取溶解液至培养皿中，顺时针摇匀，在显微镜下观察细胞状态并记录，放入二氧化碳细胞培养箱中培养，18h后更换完quan培养基。

更多有关冻存细胞后续如何处理的问题，请联系AcceGen细胞代理商——上海金畔生物科技有限公司：

一抗和二抗如何选择？

一、一抗的有关介绍

1. 概念

   一抗（primary antibody）作为一种免疫球蛋白，能够特异性结合特定蛋白并将其纯化、检测和定量。使用小鼠、大鼠、山羊、兔子以及其他动物作为寄主，可将一抗培育成多克隆（pAb）或单克隆抗体（mAb）。

2. 实验中的考虑因素

   （1）实验种属和类型的确定

          ※明确实验中的样本种属：如人、鼠、兔等，应该选择物种相同或有交叉反应的抗体。

          ※明确实验类型：如WB、ELISA、IHC、ICC、FCM 分析等，一般抗体说明书会明确说明该抗体经试验验证适用或不适用于何种分析类型，如未提及也并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而是说明尚未经过此种分析试验验证。

   （2）抗体的类型

         ※单克隆抗体：由单一B淋巴细胞分泌产生的仅识别某一特定抗原表位的、高度均一的抗体。单抗实验过程中可产生极少或无背景染色，同时也可减少与非目的蛋白的交叉反应。

         ※多克隆抗体：由多个B细胞克隆产生，针对于抗原几个表位的多种抗体混合物。多抗可识别出抗原的微小变异，能产生更强大的抗原检测信号，是涉及变性蛋白质实验首xuan抗体。

3. 分析样本蛋白的结构性质

   选择最合适的抗体还需要分析了解样本蛋白的结构性质，抗体说明书中也有相关免疫原的描述。如检测的是蛋白片段或者特殊的同型物又或是蛋白全长的某一个区域，那么则必须选择用含有此片段域的免疫原制备的抗体。

4. 抗体宿主物种的选择

   一般在用偶联的二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择就较为重要。对于IHC而言，应尽可能得选择与样本不同种系物种的一抗，从而可以避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生的交叉反应。比如：检测小鼠样本蛋白，则不要选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选择兔源的一抗，那二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。

   如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除IHC外的其它不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大。

二、二抗的有关介绍

1. 概念

   二抗（secondary antibody）可以直接和与靶抗原连接的一抗结合。在一抗与抗原结合后，标记的二抗特异性的结合一抗的Fc端。利用这种相互作用可以使二抗间接地进行检测和纯化靶蛋白（抗原）。

2. 实验中的考虑因素

   （1）种属来源

         一般会根据一抗的种属来源来选择相应的抗该物种的二抗。比如：一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则应该是抗小鼠的二抗（山羊或是兔抗小鼠）。

   （2）抗体亚型

          多克隆抗体一般主要是IgG类免疫球蛋白，相应的二抗为抗IgG抗体；单克隆抗体由于存在不同的亚型和类别，选择二抗时需要根据一抗的类型或亚类相匹配。

   二抗又分为完整抗体和抗体片段两种，根据实验来决定使用哪种，主要包括IgG分子完整抗体、Fab片段以及F(ab’)2片段。

   tips:

       ※较小的抗体片段能够更高效地渗透组织，有利于IHC及IF等实验应用；

       ※采用抗体片段可以减少抗体Fc 部分与细胞上Fc受体之间的非特异性结合，可用于分析Fc受体含量高的特定组织（例如脾）。

   （3）种属来源

          二抗的选择还与偶联的标记物有关系，二抗可以偶联不同的标记物如酶、荧光素、生物素及同位素等，形成不同的标记抗体。

          偶联物的选择会对抗体灵敏度产生极大的影响；生物素偶联物、聚合物的酶促偶联物或荧光偶联物有利于放大信号。