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exoRNeasy Midi and Maxi Kits

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exoRNeasy Midi and Maxi Kits

详情介绍

exoRNeasy Midi and Maxi Kits

Cat. No. / ID: 77144

· 高纯度的总RNA(包括小RNA部分)来自外泌体和其他细胞外囊泡(ev)

· 只从外泌体中分离RNA，不包括非囊泡蛋白复合物中的RNA

· 方便的柱上程序可以在一小时内获取RNA

· Maxi试剂盒提供的高灵敏度，允许大样本输入量检测低丰度RNA

· 从大多数生物液体中分离，包括尿液、血清、血浆、脑脊液和细胞培养上清

Product Details

exoRNeasy Midi and Maxi Kits使用亲和性膜离心柱，有效地从大多数生物液体，包括尿液，血清，血浆，脑脊液和细胞培养上清中捕获外泌体和其他ev。然后，试剂盒使用经过验证的RNeasy MinElute自旋柱从ev中分离RNA。midi柱格式可以高效地处理较小的样本体积(最多1ml血清/血浆或4ml尿液)，而maxi柱格式允许使用大样本体积，最多4ml血清/血浆、16ml尿液或32ml细胞培养上清，以高置信度检测低丰度rna。结果是快速，一致和高度适合敏感的下游应用。

Performance

exoRNeasy纯化外泌体和其他细胞外囊泡的方案不仅比超离心更快，而且制备的制剂更干净。扫描电子显微镜显示，虽然这两种技术都能提供预期大小的完整囊泡，但超离心制备也包含许多较小的结构，它们与预期大小或形状不匹配。

此外，由Bioanalyzer分析，exoRNeasy和传统的超离心方法提供了类似的大小和产量大小的RNA。

最后，exoRNeasy在血浆中捕获所有无细胞mRNA，以及ev相关的miRNAs，这是通过RT-qPCR实验对使用exoRNeasy纯化的RNA和从exoEasy柱流出得到确认的。

Principle

exoRNeasy Midi and Maxi Kits改进了传统的超离心微囊分离方法，在短短20分钟内产生纯化的细胞外囊泡。使用Exosome Diagnostics公司开发的技术，试剂盒使用自旋柱格式和专门的缓冲液从预过滤的生物液体中捕获外泌体;使用Maxi试剂盒可达32毫升，使用MIDI试剂盒可达4毫升。然后使用QIAGEN miRNeasy技术提取总RNA。整个过程，从样本到RNA，只需要一个小时。

exoRNeasy血清/血浆启动试剂盒提供midi和maxi exoEasy柱，可在不同体积的预过滤生物液中进行分析。

Procedure

从细胞外微泡分离RNA的完整实验包括两步:纯化exosomes和分离RNA。

在exosomes纯化步骤，预过滤的而浆(不包含大干0.8uM的微粒)与Buffer XBP混合，加至exoEasav亲和性膜离心柱上。

结合到柱上。使用BufferXWP洗涤结合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。

在RNA分离步骤，在QIAzol洗脱液中加入氯仿，回收水相，将其与乙醇混合。包括miRNA在内的总RNA结合到离心柱上，洗涤三次后洗脱。 

Applications

exoRNeasy试剂盒非常适合从生物流体样品中发现的微囊中分离总RNA，包括mRNA和miRNA。



exoEasy Maxi Kit

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exoEasy Maxi Kit

详情介绍

exoEasy Maxi Kit，qiagen外泌体提取试剂盒 

exoEasy Maxi Kit(20) 

Cat.No./ID:76064

For 20 vesicle preps:20 exoEasy Maxi Spin Columns,Collection Tubes(50ml),Reagents and Buffers

exoEasy MaxiKit使用了膜亲和离心柱来高效地从血浆、血清、细胞培养上清及其他生物液体中提取获得exosome及其他细胞外囊泡，Maxi规格的离心柱可允许外理大体积的样品，包括高达4ml的而浆或而清，或者32ml的细胞培养上清，实验流程非常快速一致，非常适用于提取EV进行exosome及其他细胞外囊泡的功能性分析。

Performance

用于纯化外泌小体及其他细胞外囊泡的exoEasy实验方案不仅比超速离心更加快捷，而且可获得更洁净的纯化产物。扫描电子显微镜显示两种技术均可提供完整的预期尺寸的囊泡，不过通过超速离心法制得的样品中还含有一些并不符合EV尺寸或外形的更小的结构。

提取获得的囊泡具有完整的功能，可用于多种下游应用，包括细胞培养等工作。洗脱的囊泡的性质和数量可通过多种不同的方法进行测定。其中包括电子显微镜、物理特征描述(例如，纳米颗粒追踪分析(NTA)，或可调电阴脉冲感应(TRPS)微粒分子成分分析(例如蛋白质核酸或脂米)等，由干如NTA或TRPS等微粒计数方法无法将囊泡与其他悬浮颗粒区分开，使用未经处理的生物液体或仍含有其他颗粒物(例如，蛋白复合物)的粗制备样品进行颗粒计数可能会明显地高估囊泡数目。 Principle

exoEasy Kit在传统的超速离心exosome或微泡提取方法的基础上进行了改进，可在25分钟内获得纯化的细胞外囊泡。

exoEasy Maxi Kit使用了膜亲和结合步骤来从血浆、及血清或细胞培养上清中分离exosome及其他EV。这种方法无法通过大小或细胞来源对EV进行区分，也不依赖干是否存在微粒表位，它运用了囊泡的通用生化特性来提取样品中的所有细胞外囊泡(参见图片使用NTA对由exoEasyMaxiKit提取获得的细胞外囊泡进行性质分析)。因此，必须*去除细胞、细胞碎片、凋广小体等组分，可在开始提取步骤前对样品进行离心或过滤等操作。

Exosome Diaanostics.Inc.开发的技术使用了离心柱及专门的缓冲液来从预过滤的生物液体中纯化exosome;口外理高达4 ml的血浆或而清。对干细胞培养上清，经试验验证可从高达32ml的样品中成功提取外泌小体(4次离心柱上样步骤)。不过，上清中的囊泡浓度非常依赖于细胞类型及培养条件;因此我们建议，对于未经过该试剂盒测试样品材料，起始上清体积不要超过16ml。更高的样品体积可能导致囊泡的回收率降低。实验流程非常快速一致，非常适用于exosome及其他细胞外囊泡的功能性分析。除囊泡之外的悬浮颗粒绝大部分可在结合及清洗步骤中被去除，这种颗粒包括了大体积的蛋白复合物，其在血浆及血清中含量很高。

 Procedure

提取细胞外囊泡的总流程仅需要25分钟。将预先过滤过的而浆，而清或细胞培养上清(去除了尺寸大干0.8um的颗粒)与 Buffer XBP进行混合并结合在exoEasv膜亲和第心柱上。对结合的外泌小体使里Buffer XWP进行清洗，并随后使用400ul Buffer XE(主要含无机盐的水缓冲液)进行洗脱，随后即可用于物理或生化分析。对于特定应用，如生物检测等，可能需要进行额外的浓缩或缓冲液置换步骤。此步骤可通过孔径尺寸为100kDa或更小的超滤方法来实现。 

Applications

exoEasy Kit非常适合于从血浆、血清、细胞培养上清及其他生物液体中提取微囊泡。提取获得的囊泡可用于如下应用进行分析:

· 物理性质分析(例如，NTA，TRPS)

· 电子昂微镜

· 提取并分析DNA、RNA*、蛋白质、脂类及其他成分

· 流式细胞术

· 抗体或荧光染料标记

· 受体细胞的摄取

*如需提取囊泡RNA，我们推荐使用exoRNeasv试剂盒。