Elabscience谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)比色法测试盒(E-BC-K096-M)产品介绍

Elabscience谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)比色法测试盒适用于检测血清、血浆、培养细胞、培养液及动植物组织样本中的GSH-Px 活力。

GSH-Px的作用是促进过氧化氢（H₂O₂）与还原型谷胱甘肽（GSH）反应生成水（H2O）和氧化型谷胱甘肽（GSSG），反应式如下图所示。为了表示酶的活力，可以测定单位时间内底物GSH被氧化的速度。剩余的GSH与二硫代双硝基苯甲酸（DTNB）发生反应，生成黄色的硫代硝基苯甲酸阴离子（TNB），通过测定该阴离子的浓度来计算GSH的减少量。由于在没有酶的条件下，GSH也会发生氧化（非酶反应），因此在计算酶活力时，需要扣除非酶反应引起的GSH减少量。

实验关键点

① 非酶管及酶管加入试剂二离心后的上清液必须澄清。

② 样本处理后必须做预实验。

③ 试剂一应用液必须在 37℃预温 5 min。

④ 当抑制率小于 10%时，可增加样本量。

操作步骤

酶促反应：

① 非酶管：取20μL 1 mmol/L GSH 标准品，加入1.5 mL EP管中；

酶管：取20μL 1mmol/L GSH 标准品，20μL待测样本，加入1.5 mL EP管中混匀。

② 将酶管、非酶管及试剂一应用液 37℃预温5 min。

③ 向酶管和非酶管加入10μL试剂一应用液，混匀，37℃准确反应 5 min。

④ 向非酶管加入200μL试剂二和20μL 待测样本，混匀；向酶管加入200μL试剂二，混匀。

⑤ 3100×g离心0 min，取100μL上清液作显色反应。（若上清液中含有部分沉淀物，将上清液转入新的EP管中，再次离心）

显色反应：

① 标准孔：取100μL不同浓度标准品，加入到对应的标准孔中：

非酶孔：取100μL非酶管中的上清，加入到非酶孔中；

酶孔：取100μL酶管中的上清，加入到酶孔中。

② 向步骤①中各孔分别加入100μL试剂三。

③ 向步骤②中各管分别加入50μL试剂四。

④ 酶标仪上震板10 s，静置5 min，酶标仪412 nm，测其吸光度值。

注：当样本抑制率小于10%时，可增加样本量进行检测。

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