Elabscience Caspase 2活性检测试剂盒样本如何处理？

Elabscience Caspase 2活性检测试剂盒采用分光光度法，可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的 caspase 2 活性。那么你知道Elabscience Caspase 2活性检测试剂盒样本该如何处理吗？让我们一起来看看吧！

1. 细胞样本

按照常规方法收集细胞沉淀，PBS 重悬细胞并计数，600×g 离心 5 min，弃上清，按照每 100 万细胞加入 100 μL Cell Lysis Buffer 的比例加入预冷的 Cell Lysis Buffer 重悬细胞， 在冰浴条件下裂解 30 min，裂解期间需涡旋震荡 3~4 次，每 次 10 s。裂解后的样本，于 4°C，11000 ×g 离心 10~15 min， 小心地吸取上清至新的 EP 管中，并置于冰上待用。同时使 用 Bradford 法（E-BC-K168-M）测定蛋白浓度。 注：检测贴壁细胞时，需收集诱导后产生的悬浮细胞，并与 后续收集的贴壁细胞一起检测。

2. 组织样本

取 50 mg 待测组织样本，用 PBS 或者生理盐水清洗 1-2 次， 去除组织中残留的血细胞，用手术剪剪碎，加入 200 μL 预冷 的 Cell Lysis Buffer，进行匀浆（在冰浴条件下进行，若组织 质量加倍时，加入的预冷 Cell Lysis Buffer 也需加倍）。将匀 浆好的样本转移至 1.5 mL 离心管中，冰浴裂解 30 min。裂解 后的样本，于 4°C，11000×g 离心 10~15 min，小心地吸取上 清至新的 EP 管中，并置于冰上待用。同时使用 Bradford 法 （E-BC-K168-M）测定蛋白浓度。 注：制备好的样本应立即测定，若无法及时测定，可将裂解 后的上清保存在-80°C，2 周内进行检测。

更多有关Elabscience Caspase 2活性检测试剂盒的样本处理方法，请联系Elabscience试剂盒代理——上海金畔生物科技有限公司。

Elabscience Caspase 2活性检测试剂盒的检测原理与注意事项

Elabscience Caspase 2活性检测试剂盒采用分光光度法，可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的 caspase 2 活性。那么你知道Elabscience Caspase 2活性检测试剂盒的检测原理与注意事项是什么吗？让我们一起来看看吧！

Caspase 2 也称 Ich-1 (ICE and CED-3 homolog 1)或 Nedd-2，在细胞凋亡的信号转导过程中可以被激活。Caspase 2 mRNA可以被剪切成两种不同长短的形式。Caspase 2 全长的 mRNA产物可以促进凋亡，而短的 mRNA 的蛋白产物则可以抑制细胞凋亡。在体外，Caspase 2 可以被 caspase 1、caspase 3 和granzyme B 激活。

一、检测原理

本caspase2活性检测试剂盒是基于caspase2可以催化底物Ac-VDQQD-pNA 产生黄色的 pNA(p-nitroaniline)，pNA在405nm附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测caspase 2 的活性。

二、注意事项

1. 所有待检样本都需检测蛋白浓度，由于样本裂解液中含有还原剂，不适合使用 BCA 法进行蛋白浓度测定，推荐使用考马斯亮蓝法（Bradford 法）。

2. 建议在正式实验前，选择2~3个预期差异大的样本进行预实验，若样本吸光值超过标准曲线的测量范围，则需稀释样本或者调整上样量再进行测定。

3. 进行caspase 2活性测定的样本，其蛋白浓度应在1~4 mg/mL，否则会影响实验结果的准确性。

4. 一次实验的细胞数目建议不低于1×10⁶个，组织样本不低于50mg，以便达到1~4 mg/mL的蛋白浓度。否则会影响实验的精准度，导致蛋白浓度过低，反应体系内活性caspase 2过少而OD值偏低。

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Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的常见问题有什么？如何解决？

Elabscience自主研发的Caspase 1活性检测试剂盒采用分光光度法，可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的caspase 1 活性。那么你知道Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的常见问题有什么吗？该如何解决呢？让我们一起来看看吧！

一、OD405 值偏低或无信号

1. 焦亡现象不明显或者细胞处于焦亡晚期，细胞破碎死亡。解决方法：焦亡现象不明显以及诱导过度至细胞死亡均无法有效检测到 caspase 1的活化，可设置梯度诱导浓度和诱导时间选择最佳的诱导方案。

2. 细胞诱导时的密度太大。解决方法：降低诱导时细胞的密度，摸索最佳诱导密度，推荐诱导浓密为5~10×105 /mL。

3. 细胞数目太少，Cell Lysis Buffer太多。解决方法：增加细胞的数量，每100万细胞加入50~100 µL Cell Lysis Buffer。

4. 检测总蛋白量较低。解决方法：使用Bradford 法测浓度，提高蛋白检测的总量，可以进行预实验检测，检测总蛋白不低于50ug。

5. 温度较高，Cell Lysis Buffer中的DTT失活，Caspase 酶失活。解决方法：Cell Lysis Buffer 和细胞裂解过程在冰上进行，每 10 分钟进行涡旋混匀一次，充分保证酶活。

6. 细胞沉淀的保存条件不佳，导致细胞降解，Caspase酶失活。解决方法：收集细胞沉淀后立即放入-20℃（1个月）或者-80℃（2个月）保存备用，规定时间内进行检测。

7. 37℃孵育时间过长。解决方法：适当延长 37℃孵育时间，建议最佳孵育时间为1~2小时内，随着时间延长，control 组的背景数值会逐渐增大，导致结果偏低。

二、OD405值偏高

1. 细胞处理试剂或者药物有颜色，且在405nm 波长有吸收峰。解决方法：增加细胞离心洗涤的次数，设置细胞处理试剂的空白对照，最终实验结果减去药物试剂的影响。

2. 检测样本中有较多气泡。解决方法：排除气泡后再检测。

3. 使用回收的96孔板中有杂质附着，导致结果偏高。解决方法：建议使用新的一次性 96 孔板。

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Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒怎么用？

Elabscience®自主研发的 Caspase 1 Activity Assay Kit 采用分光光度法，可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的caspase 1 活性。那么你知道Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒该怎么用吗？让我们一起来看看吧！

一、准备工作

1. Cell Lysis Buffer 溶解后混匀，冰浴备用。

2. 2×Reaction Buffer 溶解后混匀，冰浴备用。

3. Ac-YVAD-pNA 和 pNA 溶解后混匀，冰浴备用。

二、样本准备

1. 细胞样本

按照常规方法收集细胞沉淀，PBS 重悬细胞并计数，600×g离心 5 min，弃上清，按照每 100 万细胞加入 100 μL Cell Lysis Buffer 的比例加入预冷的 Cell Lysis Buffer 重悬细胞，在冰浴条件下裂解 30 min，裂解期间需涡旋震荡 3~4 次，每次 10 s。裂解后的样本，于 4°C，11000 ×g 离心 10~15 min，小心地吸取上清至新的 EP 管中，并置于冰上待用。同时使用 Bradford 法（E-BC-K168-M）测定蛋白浓度。

2. 组织样本

取50 mg待测组织样本，用PBS或者生理盐水清洗1-2次，去除组织中残留的血细胞，用手术剪剪碎，加入200μL 预冷的Cell Lysis Buffer，进行匀浆（在冰浴条件下进行，若组织质量加倍时，加入的预冷Cell Lysis Buffer 也需加倍）。将匀浆好的样本转移至1.5 mL离心管中，冰浴裂解30min。裂解后的样本，于 4°C，11000×g离心10~15min，小心地吸取上清至新的EP管中，并置于冰上待用。同时使用 Bradford法（E-BC-K168-M）测定蛋白浓度。

三、实验步骤

1. 制备 pNA 标准曲线（选做）

1) 配制标准品稀释液：取冰浴的 Cell Lysis Buffer 和2×Reaction Buffer，按照 1:1 配制标准品稀释液，涡旋或吹打混匀。

2) 进行倍比稀释：取6支EP管，第一支EP管中加入294 μL标准品稀释液，其他每管中加入150 μL标准品稀释液，从pNA (10 mM)的标准品中吸取6 μL到第一支 EP管中混匀配成 200 µM 的标准品工作液，吸取150 μL 到第2支EP管，混匀后吸取150 μL到第3支EP管，按此步骤往后依次吸取混匀至第5支EP管，如下图所示：

3) 每管取100 µL不同浓度的标准品置于酶标板或比色皿中，检测405 nm下 OD值。（为保证实验结果的准确性，建议所有的待测样本和标准品都设立复孔。）

4) 绘制标准曲线：分别以标准品浓度和对应绝对OD值（每一个标准品的 OD405减去不含pNA的OD405）作为x轴和y轴，使用图形软件绘制标准曲线，如下图所示。实测数据可能因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

2. Caspase 1 的活性检测

1) 取 50 μL 样本裂解液，按照下表设置反应体系。

2) 加入 Ac-YVAD-pNA 后混匀，37°C 孵育 1~2 h，发现颜色变化较明显时即可检测 OD405。若颜色变化不明显，可适当延长孵育时间到 4 h。

更多有关Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的使用方法，请联系Elabscience试剂盒代理——上海金畔生物科技有限公司。

Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的原理与注意事项

Elabscience®自主研发的 Caspase 1 Activity Assay Kit 采用分光光度法，可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的caspase 1活性。Caspase 1 也称 interkeukin 1β conberting enzyme (ICE)，是caspase 家族中唯yi可以剪切 IL-1β 前体蛋白或 IL-18 前体产生相应成熟的细胞因子的 caspase。那么你知道Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的原理与注意事项吗？让我们一起来看看吧！

一、检测原理

Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒是基于 caspase 1 可以催化底物Ac-YVAD-pNA 产生黄色的 pNA (p-nitroaniline)，pNA 在 405nm 附近有强吸收，从而可以通过测定吸光度来检测 caspase 1 的活性。

二、保存条件

-20°C 可保存一年。Ac-YVAD-pNA (4 mM)应适当分装并避光保存，避免反复冻融。

三、注意事项

1. 所有待检样本都需检测蛋白浓度，由于样本裂解液中含有还原剂，不适合使用 BCA 法进行蛋白浓度测定，推荐使用考马斯亮蓝法（Bradford 法）。

2. 建议在正式实验前，选择2~3个预期差异大的样本进行预实验，若样本吸光值超过标准曲线的测量范围，则需稀释样本或者调整上样量再进行测定。

3. 进行caspase 1活性测定的样本，其蛋白浓度应在1~4 mg/mL，否则会影响实验结果的准确性。

4. 一次实验的细胞数目建议不低于 1×106个，组织样本不低于50mg，以便达到1~4 mg/mL的蛋白浓度。否则会影响实验的精准度，导致蛋白浓度过低，反应体系内活性 caspase 1过少而OD值偏低。

更多有关Elabscience Caspase 1活性检测试剂盒的原理与注意事项，请联系Elabscience试剂盒代理——上海金畔生物科技有限公司。

重点推介：Elabscience Caspase系列活性检测试剂盒

产品名称：Elabscience Caspase系列活性检测试剂盒

系列简介：Caspase(cysteinyl-aspartic acid proteases)是一个蛋白酶家族,活化的Caspase会破坏一些重要的胞内蛋白从而引发凋亡的发生。Caspase通常以无活性的酶原形式存在于细胞质中，多种因素会激活Caspase的活性，一旦某个Caspase酶被激活后,会激活一系列其他的Caspase酶。将Caspases序列特异性的多肽偶联至黄色基团pNA作为底物，一旦Caspase被活化，底物被活化的Caspase剪切，黄色基团会游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值。

黄色基团pNA在405nm附近有强吸收。

Elabscience® 自主研发的Caspase系列凋亡试剂盒，用于细胞凋亡检测，特异性强，灵敏度高，操作简便快捷，质量过硬，可满足您的多种需求。

产品优势：

• 多种选择，提供多种Caspase活性检测试剂盒，满足客户不同实验需求

• 操作简单，优化组分，实验操作更简单，约1~2 h完成实验

• 性价比高，自研组分，质量稳定，价格实惠

• 应用广泛，可以定量检测样本中的酶活，适用于多种细胞

产品参数：

Elabscience Caspase系列活性检测试剂盒产品列表：

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