抗原抗体小知识

抗原（antigen）是指能够引起体内抗体生成的物质，是外来的可诱发免疫反应的物质。抗原可经过B细胞上的免疫球蛋白的辨识或者经抗原呈现细胞的处理，与主要组织相容性复合体结合成复合物后，将T细胞活化，进而引发连续的免疫反应。

抗体（antibody）是指由于抗原的刺激，在体内产生的具有保护机体作用的蛋白质。由浆细胞（效应B细胞）分泌，用来中和与鉴别外来物质如病毒、细菌等。大部分抗体存在于脊椎动物的血液等体液中，还有的存在于B细胞的细胞膜表面。抗体是免疫蛋白质，与抗原特异性结合，在宿主对细菌、病毒、真菌等感染性病原体的防御中发挥着作用。抗体呈Y型，其免疫功能是由它与抗原的结合能力决定的，抗原则是由细胞释放的或在细胞上发现的刺激免疫应答反应的分子。

抗体除在宿主免疫中发挥作用外，也广泛应用于医学研究和治疗方面。包括两种类型的抗体——多克隆抗体和单克隆抗体。

一、多克隆抗体

1. 定义：多克隆抗体(polyclonal antibody， pAb)由多种抗原决定簇刺激机体，则产生出各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混合在一起就是多克隆抗体。也就是说，多克隆抗体就是用一种包含多种抗原决定簇的抗原刺激机体的多个B细胞分泌所产生的针对于多种抗原表位的不同抗体的混合物。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。

2. 制备方式：多克隆抗体由抗原免疫动物后，从动物的血清中纯化获得。

3. 多克隆抗体制备技术路线

特异性：多克隆抗体实际上是许多单克隆抗体的集合，它们的特异性参差不齐，基本符合正态分布曲线，总体表现为处于统计学正态曲线中位线（MID）的水平。

交叉反应：多克隆抗体由于针对目标抗原的多个抗原表位，特异性低，具有生物多样性，因此存在有相同或相似的抗原表位几率高，出现交叉反应的几率也就较高。

二、单克隆抗体

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1. 定义：由单一的B细胞经过克隆产生的特异性强、高度均一的抗体。

2. 制备方式：单克隆抗体由抗原免疫动物后，B淋巴细胞与无限增殖的骨髓瘤细胞相融合，筛选出单克隆的杂交瘤细胞，通过ELISA实验筛选出能产高效价抗体的单克隆杂交瘤细胞，通过培养单克隆杂交瘤细胞即可生产与抗原特异性结合的单克隆抗体。

3. 特异性：单抗制备的后续筛选过程，可以去除大部分的非特异抗体，保留几株特异性较好的单克隆抗体，因此单克隆抗体具有更高的特异性。

4. 交叉反应：单克隆抗体具有极gao的特异性，因此存在有相同或相似的抗原表位几率很低，进而出现交叉反应的几率也低。

三、单克隆抗体和多克隆抗体的区别

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色谱小知识

色谱法是一种分离方法，是利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。

色谱法根据物质的分离机制可分为离子交换色谱法、吸附色谱法、分配色谱法、凝胶色谱法、亲和色谱法等；根据流动相的不同又可以分为气相色谱法和液相色谱法。目前常见的色谱法有气相色谱法、高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法和柱色谱法等。

柱色谱法是最原始的色谱方法，被广泛应用于混合物的分离，包括有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。薄层色谱法因其成本低廉操作简单而应用广泛，常被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等。气相色谱法和高效液相色谱法是机械化程度很高的色谱方法，气相色谱被广泛应用于小分子量复杂组分物质的定量分析。高效液相色谱法是目前应用zui广泛的色谱方法，几乎包括定量定性分析的各个领域。

气相色谱系统由气源、色谱柱和柱箱、检测器和记录器等部分组成。气相色谱的色谱柱比较细长，根据结构可以分为填充柱和毛细管柱，填充柱比较短粗，外壳材质一般为不锈钢，内部填充固定相填料；毛细管柱一般由玻璃或石英组成，内径不超过0.5 mm，长度在数十米到一百米之间，柱内填充填料。

高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成。由于液体流动相粘度比较高，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也比气相色谱柱要短。

气相和高效液相色谱系统中的色谱柱内部可填充填料，纯化分离不同的物质需要选择不同的填料/介质。

上海金畔生物科技有限公司提供BioToolomics的各种规格和型号的色谱填料/介质以及预装柱，具体信息请咨询上海金畔客服。

BioToolomics公司提供以应用为导向、具有成本效益的工艺色谱介质、色谱柱和相关的纯化技术。BioToolomics公司的产品和服务被设计用于生物制药和生命科学相关行业。工艺色谱介质、色谱柱和服务的核心特点是：高选择性、高结合能力、高通量、高灵活性、一次性、即用型、单次或多次使用以及低成本。

关于血清的这些知识，你了解吗？

• 什么是血清

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。

• 血清在细胞培养中的作用

血清的成分多样，可以给细胞提供：

1. 基本营养物质，如氨基酸、维生素、脂类物质、无机物、核酸衍生物等细胞生长必需的物质；

2. 激素：胰岛素、促生长激素、类固醇激素如睾酮和孕酮、肾上腺皮质激素如地塞米松等。

3. 生长因子：表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板生长因子、神经细胞生长因子等；

4. 结合蛋白：结合蛋白在细胞代谢过程中起着重要作用，它能携带重要地低分子量物质，如转铁蛋白结合铁离子，白蛋白携带维生素、激素等；

5. 促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤；

6. 蛋白酶抑制剂：中和某些细胞(如内皮细胞等)释放的蛋白酶，从而对培养中的细胞起到某些保护作用；

7.血清含有的一些微量元素和离子在代谢解毒中起重要作用，如SeO₃，硒等；

8.血清蛋白使血清具有一定的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，如悬浮培养搅拌时保护细胞。

• 常用的血清

目前常用的血清有胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。

以上三种血清中胎牛血清的品质ZUI高，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少，因此价格也最高。

• 血清的使用与选择

血清的使用浓度一般在5%~20%，常用是10%。

有些细胞需要胎牛血清才能生长，而有些细胞有小牛血清就能生长。因此，要根据具体用途与需要选择合适的血清。

• 血清的储存与解冻

1.储存：建议将血清储存在-5℃~-20℃（HyClone胎牛血清建议储存在-10℃）。注意：建议不要将血清储存在-80℃中！（因为储存在–80℃，解冻时巨大的温差会使血清产生更多的沉淀。）

2.解冻：不建议于4℃过夜解冻，也不建议直接将冷冻的血清放在37℃水浴或者温箱中解冻，因为若血清没有混匀，底部的蛋白会变性形成沉淀。

血清解冻的方法（三步法）如下：

注：在水浴过程中，血清要*浸入水中，同时在融化过程中要慢慢摇动瓶身混匀血清，但在摇动中尽量不要产生泡沫。

血清在解冻后，可以根据实验需求分装成单次用量，密封好后立即放回-20℃冰箱继续储存以供进一步使用，这样可以有效避免反复冻融的问题。

• 血清出现沉淀或絮状物质的原因

1. 2-8℃长时间储存。

2. 解冻过程中未混匀。

3. γ–辐照：不会损害血清的理化特性或细胞培养性能。

4. 反复冻融：使血清脂蛋白发生变性造成浑浊。

5. 血清中残留的纤维蛋白原：残留的纤维蛋白原在解冻后会转化为纤维蛋白，过量的纤维蛋白在血清中表现为可见的絮状物质。

去除方法：400 g离心。不建议直接过滤血清以去除絮状物质，因为过滤器可能会堵塞或者截留重要的蛋白质。

6. 磷酸钙：磷酸钙在血清中通常呈云状，并且在倒置显微镜下观察会看到可以自由移动的小黑点，因此磷酸钙沉淀通常被误认为是微生物污染物。

检测是否污染方法：将1 mL待测血清直接倒在细菌琼脂平板上，在37℃培养之后观察菌落的生长情况。在油镜（放大1000倍）下观察革兰氏染色，以确定是否受到污染。不建议用37℃孵育的血清直接检测无菌性，因为在37℃孵育之后，血清中的磷酸钙沉淀物会增加。

• 国内购买胎牛血清的现状

难辨真假，产地不实，有的甚至都不是牛血清。非正规胎牛血清产品会直接影响实验的结果和稳定以及数据的真实性，对实验造成很大的影响。因此，购买血清产品时一定要选择可靠的产品！

上海金畔生物科技有限公司提供来源可靠，产地可查的HyClone、Omnimabs以及澳申生物的血清产品。

• HyClone新西兰源胎牛血清产品优势：

1.「真混合」生产工艺，确保批内一致性；

2.采用一次性生产设施，*消除了交叉污染的风险；

3.最DA的批处理能力，降低批间差异造成的影响；

4.完整的来源地可追溯性；

5.低抗体含量，高生长因子；

6. Oritain^TM天然品指纹识别技术；

• Omnimabs南美胎牛血清产品优势：

1. 合法进口于无疯牛病疫区，具有合法的进口批文、海关证明以及检验检疫证明；

2. 百分之BAI原装血源；

3.采血点集中，生产工艺*，批次稳定；

4.符合GMP车间要求，满足工业客户的需要。

• 澳申生物新生牛血清产品优势：

1.国家批准的血源地，血清均可追溯源头，一瓶一码；

2.国际先JIN生产工艺：3级0.1 μm过滤，标准净化车间，万级环境下罐装，全程低温控制系统；

3.国内双重质检，全面理化、微生物检测，不含BVDPI3IBRRABVBAV BRSVBTV等牛病病毒。