慢病毒包装

慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。所以，在体外实验及体内实验的研究中，慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一， 并且正在获得越来越广泛的应用。

      在细胞实验中，对于按常规方法难以转染甚无法转染的细胞，通过使用病毒介导的方式能够大大提高基因的转导效率，达到目的基因高效表达的目的。

       具体来说，慢病毒包装主要应用于以下几个方面：

       1、对于难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，极大地方便了RNAi，cDNA克隆以及报告基因的研究；

       2、进行稳转细胞株的筛选；

       3、为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液；

       为产生高滴度的病毒颗粒，通常需要利用慢病毒表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装。慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，慢病毒包装质粒可提供所有的转录、包装、重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中。离心收集上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞后，在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白或产生RNAi干扰。

       慢病毒包装实验方法

        1.构建含有目的基因的慢病毒表达载体

        2.细胞准备：细胞传代后，密度达到70％左右时进行转染；

        3.转染复合物制备：取两个EP管，一个（A管）加入慢病毒载体的表达质粒、混合包装质粒和Opti-MEMI；另一个（B管）加入Opti-MEMI、转染试剂，一边轻柔涡旋A管，一边往A管滴加B管的溶液。溶液混合后，室温放置10-25分钟，即完成转染复合物的制备。

        4.细胞转染：将混合液逐滴加入细胞培养皿中，混匀后孵育；

        5.收集病毒：转染后48h、72h收集含慢病毒的上清；

病毒载体构建/慢病毒包装

技术简介
慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷Ⅰ型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体，属于逆转录病毒科，慢病毒属，基因结构复杂，共包含9个基因，其中有3个和单纯逆转录病毒相似结构的基因：gag、pol、env；4个辅助基因：vif、vpr、nef、vpu和2个调节基因：tat和rev。该病毒能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞，如原代细胞等，并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中，可作为一种体外运输工具，从而大大增加了转染率，同时具有感染分裂期和非分裂期细胞、容纳外源性基因片段，可以稳定表达，持续时间长等显著优点。非常适用于基因过表达稳定细胞株的建立和RNA研究。
慢病毒包装系统一般由慢病毒表达和慢病毒包装载体组成，慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。构建原理是将HIV2基因组中的顺式作用元件（包装信号和、长末端重复序列）和编码反式作用蛋白的序列进行分离。
 

慢病毒包装实验流程

技术应用

应用于稳转细胞株的筛选
为活体动物模型试验提供高质量的包含目的基因的病毒液
对于一些难转染的细胞，大大提高目的基因的转导效率

客户提供
客户与我司沟通商讨的试验方案
靶基因信息，模板或测序报告，
是否自行构建病毒载体，若需要本贵公司提供载体，需要额外收取费用

质量控制
测序鉴定
根据特定引物作RT-PCR鉴定
蛋白表达鉴定（根据客户需求，客户提供单克隆抗体）

实验周期
20~30个工作日

我们的优势
1、提供各种实验材料和仪器，满足项目课题实验需要。
2、专业的操作人员。
3、高规格实验室。
4、数据结果交付周期快。
5、完善的服务体系，全程跟进，确保满意。

服务流程
1、提交项目课题相关需求和资料。
2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。
3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。 
4、双方均满意并达成一致，签订技术服务合同。
5、开展实验，按期完成合同规定的内容。
6、结题，提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。

咨询与订购 
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