提供一种小鼠活体成像的实验流程和实验步骤

上海金畔生物科技有限公司在整体动物实验服务，动物造模实验，动物体内光学成像，实验动物饲养及造模服务、细胞周期测试、细胞凋亡测试、药动学实验外包等方面有丰富的经验。提供多种小鼠，大鼠，兔子等动物的活体成像，为您定制专业的实验方案。

小鼠活体成像的实验流程：

1. 制作动物模型：

可根据实验需要通过尾静脉注射、皮下移植、原位移植等方法接种已标记的细胞或组织。在建模时应认真考虑实验目的和选择荧光标记，如标记荧光波长短，则穿透效率不高，建模时不宜接种深部脏器和观察体内转移，但可以观察皮下瘤和解剖后脏器直接成像。深部脏器和体内转移的观察大多选用荧光素酶标记。 

2. 活体成像：

小鼠经过常规（气麻、针麻皆可）后放入成像暗箱平台，软件控制平台的升降到一个合适的视野，自动开启照明灯（明场）拍摄一次背景图。下一步，自动关闭照明灯，在没有外界光源的条件下（暗场）拍摄由小鼠体内发出的特异光子。明场与暗场的背景图叠加后可以直观的显示动物体内特异光子的部位和强度，完成成像操作。值得注意的是荧光成像应选择合适的激发和发射滤片，生物发光则需要成像前体内注射底物激发发光。 

3. 数据处理：

小动物活体成像图像处理软件除了提供含有光子强度标尺的成像图片外，还能计算分析发光面积、总光子数、光子强度的相关参数供实验者参考。

下面提供一种小鼠活体成像的实验步骤：
1).SPF级 BALB/C裸鼠，6～8 周龄，18～20克，实验前24 h 自由进食、饮水。
2).于实验裸鼠腹腔内注射2%戊巴比妥钠300μL(215 mg/ kg)动物。将裸鼠俯卧位平放于小动物多光谱活体成像系统的记录暗箱中。实验时将Cy7或Cy7标记的生物分子或药物溶于水(或甲醇/乙醇/乙二醇，有时DMSO 200uL能把小鼠杀死)稀释后，于裸鼠尾静脉注射200μL(浓度0.5 mg/mL)[用量和时间需要客户根据自己的仪器和药物试剂等条件优化]。每5min 记录1 张动物在体内发射荧光的成像图片，分析荧光药物的分布情况。对照鼠不注射药物，进行同时记录。记录结束后迅速解剖裸鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器，进行成像。
3).Cy7 检测时激发波长700～770 nm带通，发射波长790 nm长通。液晶可调谐滤光片扫描范围 780～950 nm，扫描步进10 nm。曝光时间为500 ms。

结果说明：

不同的药物代谢时间不一样，注射入裸鼠体内，荧光立即分布全身，然后逐步向膀胱聚集，呈现显著的肾排泄的特点一般4～6小时，快的只有30分钟;如果是骨骼和鼻腔等部位靶点的Cy7标记药物，有客户反映一周后活体成像系统仍能检测到荧光成像。器官切片观察：将解剖的器官迅速放置于4%多聚甲醛固定4小时以上，0%，20%，30%PBS蔗糖依次沉底，20μm切片，多聚赖氨酸洗过的载玻片贴片，晾干，DAPI染色。共聚焦显微镜观察，激光器为氦氖 633 nm。

上海金畔生物提供以下定制服务项目列表：

●药物代谢动学参数分析

●大小鼠高脂血症模型造模

●大小鼠I型糖尿病模型造模

●大鼠脊髓损伤模型造模

●肝细胞代谢稳定性试验

●基因芯片分析

●药代体外的吸收、分布、代谢和排泄研究

●药动代谢物鉴别/分析

●细胞诱导/分化实验外包

●血浆动力学检测

●组织分布研究

●细胞毒性实验

●细胞增殖与活性实验

●创伤性关节软骨损伤修复动物模型●基因敲除技术

●药代动力学体外安全性评价

●血浆蛋白结合率测定

●血浆稳定性试验

●肝微粒体代谢试验

●CYP450抑制试验

●CYP450诱导试验

●代谢产物推测

●代谢产物确证

●代谢途径的推测

●代谢途径的确证

●跨膜转运试验

●药物–药物相互作用

●代谢表型研究

近红外荧光量子点（NIRQDs）是指吸收或发射波长在700-1700nm范围内的一类荧光量子点，近一步可分为近红外一区（NIR-I，700-980nm）荧光量子点和近红外二区（NIR-II，1000-1700nm）荧光量子点，与紫外–可见区和近红外一区量子点相比，近红外二区荧光量子点的在生物标记、生物监测和活体成像等生物领域表现出巨大的潜在应用价值。由于研究起步较晚，因此无论是前期制备还是后期的应用都有很大的发展空间

近红外半导体量子点的发射波长范围通常在700~2500nm,由于它们独特的光学性质，在活体成像,量子化计算,电子和光电设备[3]等方面具有巨大的应用潜力。目前报道的近红外半导体量子点主要可归纳为以下几类:

(1) TypeII型核/壳结构量子点，如CdTe/CdSe等

(2) 合金结构，如CdTeS,CdTe,Se1-_和CdHgTe等，这种类型含有有金属，在生物成像和生物监测上一直都有争议;

(3) 环保友好的量子点，如CuInSz,CulnSer,AgzS等量子点。

产品名称：PEG修饰水溶性近红外量子点

【外观】：液体

【质量】：95%

【溶解物】：可分散于水中

【储藏方法】：2-8℃

【保质期】：6个月

【化学名】：水溶性碲化镉硒/硫化锌量子点表面为羧基，含PEG链

【用途】：化工,生物产业

【供货方式】：现货

【是否进口】：否

【特色服务】：包邮

【产地/厂商】：上海金畔生物

【可售卖地】：全国

其它量子点定制产品目录：

PEG修饰g‑C3N4量子点

PEG修饰近红外二区量子点InP量子点

PEG修饰的黑磷量子点

硫化铋PEG修饰Bi2S3量子点

PEG-NH2修饰近红外发光量子点CdSe/ZnS 量子点

PEG-COOH修饰CdSe/ZnS 量子点

PEG修饰黑磷量子点

PEG-NH2修饰CdSe/ZnS 量子点（520nm）

PEG-COOH修饰CdSe/ZnS 量子点（520nm）

PEG-NH2修饰CdSe/ZnS 量子点（525nm）

PEG-NH2修饰 近红外量子点InP/ZnS量子点

PEG3-SH偶联近红外二区量子点CdSe量子点

PLA-PEG修饰黑磷量子点

PEG-COOH修饰水溶性CdS量子点（570nm）

PEG-COOH修饰水溶性InP/ZnS量子点（520nm）

PEG-NH2修饰CdSe/ZnS 量子点（600nm）

羧基-PEG（2K）-氨基-水溶性量子点（CdSe/ZnS,605nm)

羧基-PEG（1K）-氨基-水溶性量子点（CdSe/ZnS,605nm)

叶酸修饰聚乙二醇负载硫化亚锡量子点

厂家：上海金畔生物科技有限公司

(13)C标记氨基酸及代谢物同位素丰度的方法

1．生物分离技术是指从生物有机体及其代谢产物中提取、分离、纯化有用物质的技术，对于具体实验要进行具体分析。

(1)纸层析法：各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，从而使各种色素相互分离。

(2)差速离心法：利用不同的离心速度所产生的不同强度的离心力，使具有不同质量的物质分离。

2．同位素标记法的应用分析

同位素用于追踪物质运行和变化过程时，叫做示踪元素。用示踪元素标记的化合物，化学性质不变。人们可以根据这种化合物的放射性，有关的一系列化学反应进行追踪。这种科学研究方法叫做同位素标记法。

同位素标记法的大致流程为：用同位素标记某物质或结构→同位素标记的物质或结构与无同位素标记的物质或结构混合→分析同位素存在的物质或结构及其数量的变化→得出结论。

在解答同位素示踪法应用问题时，先需分清所标记的化合物，根据示踪元素的移动位置判断生化反应的进程，进而了解细胞的结构和功能、化学物质的变化、反应机理等。

（1）标记某元素，追踪其转移途径

鲁宾和卡门用18O标记H2O，光合作用只产生18O2，再用18O标记CO2，光合作用只产生O2。证明光合作用产生的氧气中的氧原子全部来自于H2O，而不是来自于CO2。H218O→18O2

卡尔文等用14C 标记的14CO2，供小球藻进行光合作用，追踪检测其放射性，证明了CO2中的碳在光合作用中转化成有机物中碳。14CO2→14C3→（14CH2O）

用同位素14C标记，研究生长素的极性运输问题等。

（2）标记特征元素，探究化合物的作用

如蔡斯和赫尔希的T2噬菌体侵染细菌的实验中，用32P标记噬菌体的DNA，发现大肠杆菌体内有放射性物质；用35S标记蛋白质，大肠杆菌体内未发现放射性物质。由此证明了DNA是噬菌体的遗传物质。

（1）32P——DNA，证明DNA是遗传物质。

（2）35S——蛋白质，证明蛋白质外壳未进入细菌体内，不知蛋白质是不是遗传物质。下结论时，不用特意说明蛋白质不是遗传物质。

（3）标记特征化合物，探究详细生理过程，研究生物学原理

如用3H标记亮氨酸，探究分泌蛋白的分泌过程；

用3H标记胸腺嘧啶脱氧核苷酸，研究有丝分裂过程中染色体的变化规律；

用15N标记DNA，证明了DNA复制的特点是半保留复制。

（4）模型构建同位素在实验研究中的其他应用

 ①利用放射性同位素标记自显影技术，证明细胞分裂间期的最大特点是完成DNA复制、RNA和蛋白质的合成；用放射性元素标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸并追踪，研究DNA的复制；用放射性元素标记尿嘧啶核糖核苷酸并追踪，研究RNA的合成；用放射性元素标记氨基酸并追踪，研究蛋白质的合成。

  ②利用同位素14C标记植物组织，证明了植物生长素只能从形态学的上端运输到形态学的下端。

   ③用放射性同位素(如32P)或荧光分子等标记的DNA分子作探针，根据DNA分子的杂交原理，鉴定被检测标本上的遗传信息，可应用于产前诊断和环境监测。

知识网络图：