上海金畔生物科技有限公司是亲和层析填料代理商 ，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
亲和层析填料

Biotoolomics开发了专门用于病毒纯化的Viralpolish®色谱填料。 包括双层琼脂糖珠，带有惰性外壳，具有紧密控制的孔径和内部多功能配体，以快速的高容量杂质结合。
该填料是纯化病毒颗粒的理想选择。
大颗粒（例如病毒）被排除在珠子之外。 珠子可以包装在病毒将通过柱床并在流过的流中收集的圆柱中，而杂质将在珠子内捕获。 这提供了非常温和的纯化过程，导致有效清理和高度恢复活性病毒颗粒。
珠子也可以在批处理模式下使用； 当添加到含有培养基的病毒的烧瓶中时，珠子将有选择地允许小分子进入并保留，同时排除病毒并保留在外部培养基中。
病毒的典型纯化策略是将Viralpolish®作为一步，在结合和洗脱之前清理样品，通常来自设计用于病毒纯化的阴离子交换介质，例如Sepfast SuporQ。

另外，可以通过首先通过Sepfast Supor Q阴离柱纯化非常稀释的样品，以将样品集中到浓缩样品，然后穿过病毒式柱以去除残留的杂质。

病毒载体在亲和层析填料上的新选择

亲和层析填料是利用生物分子间所具有的专一性亲和力而设计的层析技术，常用于从复杂性高、难度大的进料流中捕获目标产物,是纯化病毒载体的理性型。但是，病毒载体纯化对亲和层析填料的要求也非常高，主要是由于病毒载体的滴度低、杂质水平高、敏感性强、粒径可变性大，这都给选择哪种亲和层析填料带来了不小的难度，包括层析基质（填料/整体柱/膜/纤维）和配基的选择难度也不小。

一、病毒载体纯化在亲和层析填料选择上的“拦路虎”

1.病毒载体的敏感性性强

在强酸、强碱、高盐、低盐、高剪切等环境条件下，病毒载体高度敏感，这对亲和层析填料的配基的选择带来了难度。亲和层析填料的配基跟目标病毒载体良好结合后，在相对温和的洗脱条件下，才可能避免在纯化过程中病毒颗粒由于PH的变化所导致的感染性丧失的问题。

2. 病毒载体的粒径可变性大

病毒载体的类型不同，大小也不相同，一般大小在20 到 200 nm的范围内，有些病毒载体可能更大，如溶瘤病毒。病毒载体的粒径越大，亲和层析填料的动态结合载量 (DBC)越小，所以需要更大的柱-亲和层析系统来进行纯化，这势必会增加成本。

3. 病毒清洗和消毒的问题

病毒载体的敏感性、粒径的可变性，在去除生物负荷这个问题上，也会产生不小的难度，因为一些用作亲和层析填料的配基是蛋白质或者肽，它们与在线灭菌 (SIP) 方案可能存在不兼容的地方。因此，病毒清洗和消毒对配基的选择上的重要性不言而喻。

二、病毒载体的亲和层析填料的商业化情况

1. 病毒载体的亲和层析填料商业化的挑战

病毒载体的亲和层析填料商业化具有两大挑战：一、目标较大的产物可能会产生较低的产能。因为，目前的亲和填料通常是为抗体的最佳工艺而设计的,粒径大多在 10-15 nm左右，但是许多病毒载体的粒径较大，如腺病毒为90-100nm、 γ – 逆转录病毒为80-100nm，根本无法进入孔内与基球进行结合，导致产能降低。二、亲和层析填料通常必须特定于某种病毒载体，对于 AAV ，还必须是特定的血清型（AAV2、AAV8、AAV9 等）。这就意味着这一类别的填料的应用困难，病毒载体生产商很难使用单一亲和层析填料为一系列载体构建平台纯化工艺。

2. AAV亲和层析填料商业化情况

目前，市面上的AAV亲和层析填料的类型主要有： 血清特异型和非特异型。对于血清特异型，都需要进行优化和筛选，从而找到对血清特异型能很好地与亲和配基结合的填料。

但是病毒载体的情况越来越复杂，就会存在与现有的亲和配基不结合的情况。因此，亲和层析填料的生厂商把眼光又转移到了基于电荷的平台化方法上来，这种方法能降低成本、兼容SIP和CIP工艺、跨血清型灵活。

三、AAV亲和层析填料的新方案

英国Biotoolimics推出了针对AAV的亲和层析填料：ViralPolish^TM 5000B，该产品包含双层琼脂糖珠（含惰性外壳），孔径大小受到严格控制，内部多功能配体可快速高容量结合杂质。ViralPolish^TM 5000B亲和层析填料专门为温和洗脱条件下，AAV而设计，在不牺牲动态结合载量的情况下提高碱稳定性。

中国抗体药亲和层析填料市场简析

  近年来，生物技术飞速发展，促进了生物药物的不断优化。21世纪以前，大多数生物药品集中在细胞因子、酶、干扰素等这些更容易开发和生产的药品上。进入21世纪后，抗体、激素等这些研发和生产难度更大的批准药物数量迅速增加，特别是治疗性单克隆抗体近年来取得了爆炸性增长，引LING了全球生物制药市场的新时代。2021年，经FDA批准的新抗体药物就有8个，分别是：降血脂药物（1个）、阿尔茨海默病药物（1个）、自身免疫药物（2个）、抗肿瘤药物（4个）。从形式上来看，分别是：双抗体（1个）、ADC（2个）和单克隆抗体(5个)。从上述数据可以看出，新的抗体药物越来越多,形式也越来越广泛，如ADC、Fc突变体、双抗体等。抗体药物的筛选技术正变得越来越多样化，除了传统的人源化和转基因动物，来自人B细胞测序（Aducanumab）和动物细胞展示的抗体也已进入商业化阶段。

  在生物医药领域，对于蛋白质、核酸、病毒、酶和酶抑制物的要求高、需求广，色谱技术随之发展起来，主要是纯化领域的应用，是目前分离复杂组份ZUI有效的手段之一，高纯度、高活性的生物制品制造基本都得应用此技术，层析填料技术是色谱技术中应用广泛的一种，所以层析填料的市场大、增速快、增长率高。

  疫情前，全球色谱市场主要被国外品牌占据，如GE Healthcare（现属于Danaher旗下Cytiva）、Tosoh、Bio-Rad、Biotoolomics等。经过疫情这几年，国际局势动荡，疫情影响导致的进口采购困难、货期长等问题加速了国产替代进口，国产的层析填料市场也飞速发展。

  根据层析分离模式及机理，层析填料又可分为：预活化层析填料、疏水层析填料、离子交换层析填料、凝胶过滤层析填料、亲和层析填料、多模式层析填料。其中最多用的是亲和层析填料，离子交换层析填料和疏水层析填料。在抗体纯化领域，亲和层析填料所占比重高于其他任何一种填料。

  在亲和层析填料中， Protein A 层析填料是填料市场最为重要的一类。Protein A是从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质，可特异性与人或哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区域结合，主要结合亚类为IgG1、IgG2和IgG4。分为天然Protein A和重组Protein A。重组Protein A更耐碱性，且耐受蛋白酶，有效解决CIP的问题。Protein A填料作为抗体纯化的核心步骤，产品系列主要集中在：Sepharose 系列和MabSelect系列(Cytiva)，Praesto®系列Protein A亲和填料（Purolite Life Sciences），Amsphere A3（日本JSR和TOSOH公司）, Protein A & Alkaline-stable Protein A SepFast Range（英国Biotoolomics公司）。Biotoolomics推出的Protein A SepFast系列主要有：Protein A SepFast Large Bead、Protein A SepFast HighRes、Protein A SepFast，其中Protein A SepFast Large Bead适合处理粘性或含细胞的原料(即高沉降率和极低的柱压)；Protein A SepFast HighRes适合小柱运行，停留时间短(即较高的流速)；Protein A SepFast适用于大多数从小规模到大规模的纯化需求(即低柱压)。

   Protein A亲和捕获所占据的市场大，价格高，是“兵家必争之地”。Biotoolomics的Protein A产品动态载量大，抗体生产效率高，成本低，给市场带来了新的契机。

亲和层析介质纯干货分享

  亲和层析（Affinity chromatography）是一种根据生物分子与其他配基分子之间特异性结合的原理来分离物质的层析方法。通过配基与目标分子之间的可逆结合来实现纯化目标分子的目的。亲和层析具有高选择性，而且能有效地保持生物大分子高级结构的稳定性，同时还具有对活性样品高回收率的特点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。

亲和层析原理

常用的生物亲和关系有：

亲和层析介质是在交联琼脂糖上连接不同亲和配基构成的介质，由基质、配基和间隔臂三个部分组成。亲和层析介质按配基不同又可分为多种类型，比如Protein A和Protein G亲和层析介质，GST亲和层析介质，IMAC（金属螯合介质）亲和层析，Heparin（肝素）亲和层析介质等。

亲和层析介质结构

对于IgG的纯化，大部分情况下会选择使用Protein A或Protein G进行亲和层析。因为它们对于IgG的Fc段具有特异性的亲和作用。

其中Protein A是从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质，可特异性与人或哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区域结合，主要结合亚类为IgG1、IgG2和IgG4。分为天然Protein A和重组Protein A。重组Protein A更耐碱性，且耐受蛋白酶。

Protein G是从G类链球菌中分离出来的胞壁蛋白。相对于Protein A，Protein G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力，尤其是对于IgG的亚基，如人IgG3，小鼠IgG1和IgG2a。因此，Protein G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物单抗和多抗IgG。

   GST亲和层析介质是一种用于快速纯化谷胱甘肽s –转移酶(GST)标记蛋白、其他谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用的蛋白质的分离介质，可以快速纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞培养物中表达的GST标记蛋白。

IMAC亲和层析介质是基于某些过渡金属离子（主要是Ni²⁺、Zn²⁺和Co²⁺）与含有组氨酸（或半胱氨酸和色氨酸）的暴露氨基酸表面链之间的特定相互作用。IMAC用于纯化在细菌、酵母和哺乳动物细胞中表达的带组氨酸标签的重组蛋白，还可用于纯化某些天然的非标记蛋白质，例如干扰素、凝集素、抗体、血清和血浆蛋白、肽和肽激素。

Heparin亲和层析介质用于纯化对肝素有亲和力的生物分子，如抗凝血酶III、凝血因子和其他血浆蛋白、DNA 结合蛋白、脂蛋白、蛋白质合成因子、作用于核酸的酶和类固醇受体等。

上海金畔生物科技有限公司提供多种种类和规格的Biotoolomics亲和层析介质和层析柱，更多产品和产品信息可咨询上海金畔客服。

亲和层析填料介绍

亲和色谱（Affinity chromatography，又称为亲和层析）是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子，并且这种结合是可逆的，在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子，也可以用来去除或减少混合物中某一分子的含量。

亲和色谱具有高选择性，而且能有效地保持生物大分子高级结构的稳定性，同时还具有对活性样品高回收率的特点，所以亲和色谱可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白质，还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。

BioToolomics开发了多种亲和层析填料，比如谷胱GAN肽亲和层析填料、蛋白A亲和层析填料、蛋白G亲和层析填料、钴亲和层析填料、镍亲和层析填料和肝素亲和层析填料等。

谷胱GAN肽亲和层析填料（Glutathione SepFast）是一种用于快速纯化谷胱GAN肽s –转移酶(GST)标记蛋白的亲和层析填料，可以快速纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞培养物中表达的GST标记蛋白。

蛋白A亲和层析填料和蛋白G亲和层析填料是一种用于纯化免疫球蛋白的亲和层析介质，可以用于从生物体液和细胞培养基中分离和纯化免疫球蛋白的类别、亚类和片段：

·Protein A SepFast Large Bead和Protein G SepFast Large Bead，粒径：150 – 350µm，特别适合处理粘性或含细胞的原料(即高沉降率和极低的柱压)；

·Protein A SepFast HighRes和Protein G SepFast HighRes，粒径：20 – 50 µm，适合小柱运行，停留时间短(即较高的流速)；

·Protein A SepFast和Protein G SepFast，粒径：50 – 150 µm，适用于大多数从小规模到大规模的纯化需求(即低柱压)；

固定化金属亲和色谱 (IMAC) 基于某些过渡金属离子（主要是Ni²⁺、Zn²⁺和Co²⁺）与含有组AN酸（或半胱AN酸和色AN酸）的暴露氨基酸表面链之间的特定相互作用。IMAC用于纯化在细菌、酵母和哺乳动物细胞中表达的带组AN酸标签的重组蛋白，还可用于纯化某些天然的非标记蛋白质，例如干扰素、凝集素、抗体、血清和血浆蛋白、肽和肽激素。IMAC SepFast或其三种带金属电荷的形式（Ni SepFast、Co SepFast和Zn SepFast），具有高度稳定性并与蛋白质纯化过程中常用的多种化学品（例如去垢剂、变性试剂和还原剂等）兼容。

肝素亲和层析填料（Heparin SepFast）用于纯化对肝素有亲和力的生物分子，如抗凝XUE酶III、凝XUE因子和其他血浆蛋白、DNA 结合蛋白、脂蛋白、蛋白质合成因子、作用于核酸的酶和类固醇受体等。

上海金畔生物提供Biotoolomics各种类型和规格的亲和色谱填料，详细信息请咨询上海金畔客服。