“FFPE DNA提取”你需要的，都在这里！

多年来，石蜡包埋切片技术一直是用于病理检查的主要手段，随着科学不断发展，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸多领域，许多肿瘤都可以用基因及其蛋白质产物等在分子结构上的变化来解释其病因和发病机制。新鲜或速冻样本是DNA的重要来源，但是收集和维护它们的成本很高，因此无法广泛获得。1985年，Goelz等^[1]最先从石蜡包埋组织中提取出高质量的DNA，结束了DNA研究依赖于新鲜或速冻样本的历史，石蜡包埋组织DNA提取技术对肿瘤发生的分子机制的探讨，诊断与研究等方面均具有重要价值。

石蜡包埋组织DNA的脱蜡方法有物理法，二甲苯脱蜡法，72℃保温脱蜡法，TES溶液水浴脱蜡法等，目前ZUI常用的是二甲苯脱蜡法，但二甲苯是有毒试剂，是3类致癌物之一。ZYMO通过多年研发，推出了一款快速简便且DU有的无毒脱蜡液的FFPE DNA提取试剂盒。

上海金畔生物科技有限公司提供此款试剂盒：

简介：

FFPE DNA小量提取试剂盒为从福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织样本和切片中高产量/高质量地分离DNA提供了一种简单而可靠的方法。该产品的独TE化学成分经过优化，可最大限度地回收非交联、超纯DNA，而且不会受到RNA污染。只需使用提供的蛋白酶K消化脱蜡组织，加热，然后使用试剂盒中的Zymo-Spin柱纯化DNA。PCR抑制剂在分离过程中被有效去除，洗脱的DNA是PCR、下一代测序、酶操作等的理想选择。

操作流程示意图：

优点：

提取效率比较：

使用本试剂盒与供应商Q Kit从同样样本中提取到的DNA进行实时PCR分析比较。如上图的扩增曲线所示，使用本试剂盒分离的DNA始终产生较低的Ct值。

兼容不同片段提取：

本试剂盒选择性分离DNA＞50bp或＞500bp的DNA，然后在1%琼脂糖凝胶上进行分析。

提取步骤：

脱蜡：

1.尽可能多的从组织上去除石蜡，然后将样品放置到一个1.5 ml离心管中。

注意：最多处理25 mg石蜡块中的组织或最多4个组织切片（总表面积20mm²）建议处理1-2个切片

2.向样品中加入400 μl脱蜡液，55°C孵育1分钟，短暂涡旋。

3.除去样品中的脱蜡溶液然后处理下一个切片。

组织消化：

1.针对离心管中去除了脱蜡液的组织样品 (≤25 mg) ，加入以下混合物：

2.

3.将温度调到94°C孵育20分钟。然后加入5 μl RNase A，混匀，在室温下再孵育5分钟。

DNA纯化：

1. 向离心管中加入350 μl Genomic Lysis Buffer，涡旋混匀。

2. 向样品中加入135 μl异丙醇（自行准备）并混匀。≥ 12000×g离心1分钟，去除不溶物。

3. 将上清液转移到Zymo-Spin? IICR柱中，Zymo-Spin? IICR柱套在一个收集管里，10000×g离心1分钟。

4. 将Zymo-Spin? IICR柱套在一个新的收集管中，加入400 μl Genomic DNA Wash 1，10000×g离心1分钟。弃掉收集管中的废液。

5. 向Zymo-Spin? IICR柱中加入700 μl Genomic DNA Wash 2，≥ 12000×g离心1分钟。弃掉收集管中的废液。

6. 向Zymo-Spin? IICR柱中加入200 μl Genomic DNA Wash 2，≥ 12000×g离心1 分钟。

7. 将Zymo-Spin? IICR柱转移到干净的微量离心管中。加入≥ 50 μl DNA Elution Buffer或水（如果采样25 mg组织，添加≥ 100 μl）到柱基质上。室温下放置 2-5 分钟。

8. 全速离心30秒以洗脱 DNA。

洗脱的DNA可立即用于基于分子的应用或储存在≤-20oC以备将来使用。

[1] GOELZ SE, HAMILTON SR, VOGELSTEIN B. Purífication of DNA from formaldeyde fixed and paraffin-embedded tissues[J].Biochem Biophys Res Commun, 1985, 130(1):118-126.