UDP糖|大肠杆菌中糖甘油脂生产的代谢工程:调节磷脂酸和udp -葡萄糖通路

糖脂作为生物表面活性剂、生物材料和生物活性分子,是生物技术和生物医学领域的靶标分子。

一种用于生产糖甘油脂(GGL)的工程大肠杆菌菌株使用生殖支原体的MG517糖脂合酶将糖基从UDPGlc转移到甘油二酰基受体(Mora-Buyé et al., 2012)。

胞内甘油二酰基池是GGL生成的限制因素。在这里,我们设计了不同的代谢工程策略,通过调节脂肪酸、酰基供体和磷脂酸的生物合成来提高糖脂合酶前体底物的可用性。

德莎的淘汰赛,褪色和fabR基因参与脂肪酸降解,超表达的转录监管机构FadR,酰基转移酶的PlsB和C,和焦磷酸酶鼎晖磷脂酸生物合成,以及磷酸酶PgpB转换为二酰基甘油进行了探讨,目的是改善GGL滴度。

在不同的工程菌株中,MG517共表达的ΔtesA菌株和融合的PlsCxPgpB蛋白的产量最高,与单独表达MG517的亲本菌株相比,GGL滴度提高了350%。

通过过表达尿苷转移酶GalU或敲除udp -糖二磷酸酶编码基因ushA来提高UDPGlc的有效性并没有进一步提高GGL的效价。大多数菌株产生的GGL含有从单糖到四糖的不同数量的葡萄糖基单位。

有趣的是,共表达Cdh的菌株GGL谱向二糖基化脂质转移(占GGLs总量的80%),而fadR敲除的菌株具有更多的不饱和酰基链。

在所有情况下,GGL的产生改变了大肠杆菌膜的脂质组成,观察到GGL取代磷脂酰乙醇胺来维持膜的总体电荷平衡。

UDP糖|大肠杆菌中糖甘油脂生产的代谢工程:调节磷脂酸和udp -葡萄糖通路

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