检测抗体药物偶联物ADC的药物抗体偶联比（DAR）值的方法
抗体药物偶联物 (ADC) 是金畔生物公司药物开发途径中快速发展的一类新型生物治疗药物。ADC的制备方法是通过化学方法将具有生物活性的小分子药物与单克隆抗体相连，ADC 通过结合高效细胞*性药物与靶标特异性抗体将细胞*性药物直接送达病变组织，同时限制药物在非目标组织中的*性。
抗体药物偶联物 (ADC) 是一种蛋白质——通常为单克隆抗体 (mAb)——通过ADC交联剂共价结合（偶联）到小分子药物。 mAb的定位能力与强效抗癌药物相结合，可敏感地辨析健康细胞和患病细胞。 鉴于偶联药物的效力，开发这些生物治疗药物比单独开发mAb更加困难，包括设计用于详细表征ADC的 UHPLC系统、质谱系统和LC色谱柱，能让您更方便地分离和表征这些新型分子。
ADC药物的药效和清除率都与药物抗体偶联比（DAR）值有关，因此在药物开发过程中必须对其精确分析。尺寸排阻色谱法和疏水色谱法是在天然生理条件下检测DAR的两种最常用的方法。
通过SEC-MS和HIC-UV法来对一个半胱氨酸偶联的ADC药物模拟物进行分析。该模拟物是由LC-SMCC交联剂将丹磺酰基萤光团共价键合到IgG1-mAb上，形成一个载药量不同（0-8）的抗体混合物。我们选用了TSKgel SuperSW3000尺寸排阻色谱柱。将ADC注入该色谱柱中，HPLC系统与质谱相连，在SEC-MS方法中，用于检测DAR谱图。从谱图中观察到，每个主峰之间的分子量差异为1336 Da，对应两个丹磺酰基荧光团分子的分子量。SEC/MS分析表明，平均DAR为3.9 。
ADC模拟物的SEC/MS谱图
然后，使用TSKgel Butyl-NPR疏水色谱柱和UV检测，来确认DAR分布情况。mAb抗体结合的药物分子数越多，ADC的疏水性越大，在HIC固定相上的保留时间长，载药量不同的组分便可得到分离。从DAR谱图中可以看到，DAR=0-8的各峰之间分离情况很好。
ADC模拟物的HIC-UV谱图
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