肠癌3D类器官培养基

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肠癌3D类器官培养基

详情介绍

产品名称肠癌3D类器官培养基Intestine Carcinoma Organoid Medium)
产品说明肠癌3D类器官培养基Intestine Carcinoma Organoid Medium)是一种为促进人源肠癌类器官体外形成和扩增而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基的*配方可以提供一个理想人源肠癌类器官体外培养环境,选择性地促进体外人源肠癌类器官的生长。

产品优势
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤特征

(4) 药敏结果与临床数据接近

使用说明:
实验前准备
1)15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
2)提前30min从4℃冰箱取出肠癌类器官培养基平衡至室温,提前1h从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。
食管癌类器官培养
1)将获取的肠癌原代细胞悬液计数,根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中,补齐预冷的肠癌类器官培养基至所需体积。
2)将预冷后的细胞悬液加入等体积的基质胶中轻轻混匀(全程冰上操作),避免气泡,使肠癌原代细胞终浓度为5× 105个细胞/量升。然后将细胞与基质胶的混合液按照50uL/孔呈半球形点胶干24孔板。
3)将培养板放入5%CO2 37℃培养箱终至少30min,待基质胶*凝固。沿孔壁每孔缓慢加入500μL预先恢复至室温的类器官培养基,放置5%CO2、37℃培养箱培养。
4) 3天后镜下观察类器官形成情况粒径大于30~50μm即认为类器官已经形成。
5)每5天更换一次培养基进行培养,持续观察类器官大小,镜下观察大部分类器官大小均大于30~50μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。
食管癌类器官收集

(1)弃培养基,每孔加入200μL基质胶解离试剂,室温放置1min,轻轻吹打混匀,收集至15mL离心管中。
(2)50rpm恒温震荡解离10-20min,解离之后1500rpm离心3min,轻吸去上清,待用。

食管癌类器官传代
1)收集的类器官,加入适量的消化酶,37℃,200rpm消化(具体时间根据类器官大小和数量决定,以肉眼可见颗粒明显减小一半为准,可中间取消化的类器官显微镜观察,类器官消化至3~10个细胞集合体理想)。

2)消化*后1500rpm离心3min,弃上清,使用清洗液重悬后1500rpm离心3min;加入预冷的肠癌类器官培养基进行重悬,计数,按照培养步骤操作继续培养。
注意事项:
1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.样本需为肿瘤组织,且肿瘤细胞比例越高(>50%),类器官培养成功率越高。3.使用产品时应注意无菌操作,避免污染。
4.为保持本产品的理想使用效果,不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。5.类器官培养过程要轻柔,避免基质胶凝固后散胶。
6.请于保质期内使用本产品,超出保质期,必须放弃使用。
7.本产品仅用于科研用途,不能用于体外诊断。

原代肠癌*培养基

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原代肠癌*培养基

详情介绍

产品名称原代肠癌*培养基(Human intestine Carcinoma Cell Medium)
产品说明原代肠癌*培养基Human intestine Carcinoma Cell Medium)是一种为促进人源肠癌原代细胞体外生长而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。培养基基于碳酸氯盐的缓冲体系,在5%CO2、37℃培养箱中平衡时,pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个理想人源肠癌原代细胞体外培养环境,选择性地促进体外人源肠癌原代细胞的生长。

产品优势
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤原始病理特征

(4) 药敏结果宇临床数据接近

使用说明:
使用前准备
1)预冷的DMEM/F12培养基稀释基质胶(Corning#356231)(50倍稀释,现配现用),并取适量*覆盖培养容器,在5%CO2 37℃包被培养容器底部0.5~3h,使用时弃上清。
2)15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面75%酒精消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min;提前30min从4 ℃冰箱取出*培养基平衡至室温。
肠癌原代细胞培
1)至少提前半小时使用稀释后的基质胶预铺培养瓶/板,使用前吸弃基质胶,用稀释液润洗一遍。
2)将分离并计数后的细胞悬液参考表1中细胞数量接种于培养瓶/板,补加*培养基至所需体积,轻轻摇晃混匀,75%酒精表面消毒后放置培养箱,37℃、5%CO2培养。
3)原代细胞初次接种后2-3天内勿动(利于细胞贴壁),第一次换液建议换半液。

肠癌原代细胞传代
1)镜下观察细胞形成克隆,且汇合度85~95%时即可传代。
2)培养箱中取出细胞,弃旧培养液,0.05%胰酶洗涤5秒后吸尽,再加入适量0.05%胰酶,37℃孵育,2~5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面,显微镜下观察细胞消化情况。
3)细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用原代细胞终止培养基终止消化,并将细胞转移至离心管中,1500 rpm, 3min。
4)弃上清,以1~5mL条件培养基重悬细胞,活细胞计数,将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板,(不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量如表1所示),补加培养基至所需体积,十字交叉混匀,培养容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培养箱培养。其他步骤同上。
注意事项:

  1. 本产品在使用前需平衡至室温。

  2. 使用产品时应注意无菌操作,避免污染。

  3. 本产品中不含血清,含有原代细胞专用抗生素,如无特别需要不用额外再添加血清和双抗,可直接使用。

  4. 样本需为肿瘤组织,且肿瘤细胞比例越高(>50%),培养成功率越高。

  5. 为保持本产品的理想使用效果,不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。

  6. 请于保质期内使用本产品,超出保质期,必须放弃使用。

  7. 传代消化时切记不要消化过度,不宜超过5min,对细胞造成损伤,影响细胞状态。

  8. 本产品仅用于科研用途,不能用于体外诊断。

原代肠癌条件重编程培养基

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原代肠癌条件重编程培养基

详情介绍

产品名称原代肠癌条件重编程培养基(Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
产品说明原代肠癌条件重编程培养基Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium是一种为促进人源肠癌原代细胞体外生长而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统,含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质和一定量的血清。培养基基于碳酸氢盐的缓冲体系,在5%CO。、37℃培养箱中平衡时,pH值为7.4。该培养基的配方可以理想人源肠癌原代细胞体外培养环境,选择性地促进体外人源肠癌原代细胞的生长。

产品优势
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤原始病理特征

(4) 药敏结果宇临床数据接近

使用说明:
使用前准备
(1) 15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min;提前30min4 ℃冰箱取出原代细胞培养基平衡至室温。

(2)γ 射线照射过的NIH-3T3细胞(40 Gy辐照)。
癌原代上皮细胞培养
1获取的人源肠癌原代细胞,按照表1中细胞数接种在合适的培养器皿中,加入y射线辐照后的NIH-3T3细胞(添加滋养细胞数量如表1和表2所示)。

2原代细胞初次接种后2-3天勿动(利于细胞贴壁),培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可进行半换液,镜下观察细胞未长满但3T3细胞已不足时,适量补充γ射线辐照后的3T3细胞(一般补加初始数目的一半)。
针对实体瘤样本,细胞粒径大于12微米进行计数;倍增时间>48小时则定义为增殖较慢的细胞;对于增殖较快细胞,可以综合倍增时间、接种器皿的规格以及培养周期来估算接种的细胞数量;表格供参考,具体实验具体对待。
肠癌原代上皮传代
1)镜下观察细胞形成克隆,且汇合度85~95%时即可传代。

2)培养箱中取出细胞,弃旧培养液,0.05%胰酶洗涤5秒后吸尽,再加入适量0.05%胰酶,37℃孵育,2~5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面,显微镜下观察细胞消化情况。
3)细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用原代细胞终止培养基终止消化,并将细胞转移至离心管中,1500 rpm,3min
4)弃上清,以1~5mL相对应的原代细胞培养基重悬细胞,活细胞计数,将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板,加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量如表1、表2所示)
5补加肠癌培养基至所需体积,十字交叉混匀,培养容器75%表面消毒后置培养箱,37℃5%CO2条件培养。其他步骤同上。
注意事项:

  1. 本产品在使用前需平衡至室温。

  2. 使用产品时应注意无菌操作,避免污染。

  3. 本产品中含有一定比例的血清和原代细胞专用抗生素,如无特殊需要不用额外再添加血清和抗生素,可直接使用。

  4. 样本需为肿瘤组织、内镜组织,且肿瘤细胞比例越高(>50%),培养成功率越高。

  5. 为保持本产品的理想使用效果,不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。

  6. 传代消化时切记不要消化过度,不宜超过5min,对细胞造成损伤,影响细胞状态。

  7. 请于保质期内使用本产品,超出保质期,必须放弃使用。

  8. 本产品仅用于科研用途,不能用于体外诊断。