贴壁细胞培养和悬浮细胞培养的区别

贴壁细胞培养和悬浮细胞培养的区别

  细胞培养有两种基本方式,一种是人工基质上的单层细胞(贴壁培养),另一种是在培养基中自由漂浮(悬浮培养)。那么你知道贴壁细胞培养和悬浮细胞培养的区别是什么吗?让我们一起来看看吧!
  一、贴壁培养
  贴壁培养是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养(瓶)器皿壁上,细胞一经贴壁就迅速铺展,然后开始有丝分裂,并很快进入对数生长期。一般数天后就铺满培养表面,并形成致密的细胞单层。
  二、悬浮培养
  悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里,培养单细胞及小细胞团的组织培养系统,贴壁细胞培养和悬浮细胞培养的区别在于它是非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单,只要增加体积就可以了。深度超过5mm,需要搅动培养基,超过10cm,还需要深层通入CO2和空气,以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。
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贴壁细胞培养的步骤有哪些?

贴壁细胞培养的步骤有哪些?

在动物细胞培养过程中,必须有可以贴附的支持物表面,其依靠自身分泌或培养基中的贴附因子才能在该表面生长增殖的离体动物的培养细胞。那么贴壁细胞培养的步骤有那些呢?让我们一起来看看吧!

1. 将含有冻存细胞的安瓿放入37℃水浴中解冻。

2. 用70%乙醇对安瓿的顶端进行消毒,打开安瓿,用吸管将细胞转移到含有5ml起始培养基的25cm2组织培养瓶中,轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,将其放入5%CO2加湿培养箱中37℃培养过夜。

3. 吸出起始培养基,换成适当的维持培养基。将细胞放回CO2培养箱37℃培养,每天检查细胞是否生长至汇片。

4. 如果细胞生长至汇片,吸出培养基。

5. 用PBS或胰酶/EDTA清洗细胞,除去细胞上残留的血清,将洗液吸出。

6. 用37℃、适当体积的胰酶/EDTA刚好覆盖单层细胞(如对于25cm2培养瓶需要0.3ml)。消化30~40s(细胞应该分开),晃动培养瓶使细胞wan全分开。

7. 加入1.4ml适当的维持培养基,用吸管来回吹打细胞悬液多次以打散细胞团(这些细胞用于传代)。

8. 吸出0.5mL的细胞悬液,将其加入到新的含有30ml维持培养基的组织培养瓶中。轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,将其放入CO2培养箱中37℃培养直到细胞生长至汇片(大约1周)。大约间隔一周用维持培养基进行1:20稀释传代以维持细胞生长。

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