上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-ALD 3.4k 脂质体聚乙二醇丙醛 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05473
中文名：脂质体聚乙二醇丙醛 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-ALD 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-acryloyl 3.4k 脂质体聚乙二醇丙烯酸 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05472
中文名：脂质体聚乙二醇丙烯酸 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-acryloyl 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-SPA 3.4k 脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05471
中文名：脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-SPA 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-PA 3.4k 脂质体聚乙二醇丙酸 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05470
中文名：脂质体聚乙二醇丙酸 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-PA 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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Millipore过滤膜SMWP02500孔径5um直径25mm
Millipore过滤膜SMWP02500孔径5um直径25mm
说明:MF-Millipore 表面滤膜，混合纤维素酯，亲水，5.0 µm，25 mm，白色，光面
商标名:MF-Millipore
数量/包装:100
滤膜材质:Mixed Cellulose Esters
滤膜商标名:MF-Millipore
折射率:1.495
水通量，mL/min x cm2:580
23 °C 时的泡点:≥0.42 bar
zui高操作温度，°C:75
滤膜孔径，µm:5.0
可润湿性:亲水
蛋白质吸附 (µg/cm2):150
滤膜直径，mm:25
滤膜代码:SMWP
滤膜颜色:白色
产品名称:MF-Millipore 表面滤膜
滤膜表面:光面
重量分析溶出物，%:6
厚度，µm:160
空气流速，L/min x cm2:32
孔隙率 %:84
上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-SCM 3.4k 脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺乙酸酯 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05469
中文名：脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺乙酸酯 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-SCM 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
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NGS测序之文库构建
由于二代测序读长的限制，不可能一下将一个很长的基因序列测通，因此需要先将长基因序列随机片段化成小片段，这样的话，这些片段就可以覆盖整个基因组。所以需要构建文库。
一、文库构建的步骤
文库构建大致步骤类似，但是各有各自du特的点，例如，RNAseq里miRNA，lncRNA，mRNA方法各有差异，具体方法以后有机会再补充。这里以Illumina的 PE文库为例，其流程图如下图。
二、文库构建详细步骤
（1）DNA片段化 （Fragment DNA）
使用超声、酶或者加热的方式将DNA样品打碎成小片段，一般在300 ~ 800bp之间除非有特殊要求。
（2）末端修复（End Repair）
补平片段化时导致的不平末端。
（3）3' 末端加“A” （A-tailing）
3‘ 末端加A，转换为粘性末端，与adapter 互补配对，因为adapter 3‘端有一个突出的T。
（4）接头连接（ ligation adaptor）
这一步有两种不同的添加策略如下图。
左边的图是直接在fragment DNA的两端直接加上full Y-adapter, adapter中已经包括了和P5/P7 oligo互补的序列, index, 以及Read1/Read2的测序引物。
右边的图是先在fragment DNA的两端加上PE adapter, 然后再引入和P5/P7 oligo互补配对的序列以及index序列，分两步：
A. PE adapter添加利用碱基互补配对的原则，加上PE adapter。PE adpater中一部分是建库PCR富集时候需要用的引物序列，另一部分是测序时需要用的引物。
B.PCR 添加 index，P5，P7
Index也称barcode，用来区分不同样本的文库，因为测序仪一个lane产生数据量若干Gb，为了最da化利用测序仪，一次上机常会进行多个样本文库混合测序，在后续分析时，Index用来区分数据是来自哪个样本。
● PCR富集目的片段
进行PCR扩增，循环数与投入的DNA量有关，使得文库达到上机浓度。
● 扩增文库大小质检
使用Agilent 2100对文库的insert size进行检测。
● 文库浓度定量
Qubit3.0 进行初步定量 Q-PCR对文库的有效浓度进行准确定量，至此文库构建结束。
更多有关NGS测序之文库构建的相关内容，请联系BioDynami建库试剂盒代理商——上海金畔生物科技有限公司：
上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-SS 3.4k 脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酯 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05468
中文名：脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酯 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-SS 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-SG 3.4k 脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05467
中文名：脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-SG 3.4k
端基取代率：》95%
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分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-SC 3.4k 脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯 分子量MW 3400
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货号：JPB-05466
中文名：脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-SC 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
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分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-SVA 3.4k 脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05465
中文名：脂质体聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯 分子量MW 3400
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端基取代率：》95%
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-NHS 3.4k 脂质体聚乙二醇羟基琥珀酰亚胺酯 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05464
中文名：脂质体聚乙二醇羟基琥珀酰亚胺酯 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-NHS 3.4k
端基取代率：》95%
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-Thiol 3.4k 脂质体聚乙二醇巯基 分子量MW 3400
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货号：JPB-05463
中文名：脂质体聚乙二醇巯基 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-Thiol 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
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分散度：《1.05
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PALLFLEX过滤膜Tissuquartz过滤膜7203
PALLFLEX过滤膜Tissuquartz过滤膜7203 7204
可用于高温和热气体的监测应用，很适合环境管理机构所要求的排放物测试。
Tissuquartz过滤膜：1、经过热处理以减少微量有机物，达到很高的化学纯度。2、适用于高温环境，对酸性气体和气溶胶进行分析。3、高流速、高过滤效率。
说明：Tissuquartz过滤膜，石英，无粘合剂
厚度：432um
重量：5.8mg/cm2
zui大操作温度：1093摄氏度
气溶胶截留：99.9%
Tissuquartz 过滤膜, 2500 QAT-UP
|
货号 |
说明 |
包装 |
|
7200 |
2500 QAT-UP, 25 mm |
100/pkg |
|
7201 |
2500 QAT-UP, 37 mm |
25/pkg |
|
7202 |
2500 QAT-UP, 47 mm |
25/pkg |
|
7199 |
2500 QAT-UP, 54 mm |
25/pkg |
|
7191 |
2500 QAT-UP, 60 mm |
25/pkg |
|
7197 |
2500 QAT-UP, 63.5 mm |
25/pkg |
|
7196 |
2500 QAT-UP, 64 mm |
25/pkg |
|
7205 |
2500 QAT-UP, 82.6 mm |
25/pkg |
|
7190 |
2500 QAT-UP, 83 mm |
25/pkg |
|
7206 |
2500 QAT-UP, 85 mm |
25/pkg |
|
7187 |
2500 QAT-UP, 87.5 mm |
25/pkg |
|
7203 |
2500 QAT-UP, 90 mm |
25/pkg |
|
7195 |
2500 QAT-UP, 100 mm |
25/pkg |
|
7207 |
2500 QAT-UP, 102 mm |
25/pkg |
|
7250 |
2500 QAT-UP, 110 mm |
25/pkg |
|
7249 |
2500 QAT-UP, 115 mm |
25/pkg |
|
7208 |
2500 QAT-UP, 125 mm |
25/pkg |
|
7251 |
2500 QAT-UP, 142 mm |
25/pkg |
|
7204 |
2500 QAT-UP, 8 x 10 in. |
25/pkg |
NGS测序为什么需要文库构建?
NGS即Next-generation sequencing，又叫第二代测序技术或者高通量测序技术或者下一代测序技术。
文库是DNA/RNA样本在测序前做的一系列准备，因为原始的核酸样本无法直接用于测序，只有经过处理的样本才能满足测序平台的要求，比如在DNA样本两端添加测序bi备的接头；样本量不足时，可以通过PCR扩增达到上机的要求等。NGS测序为什么需要文库构建?让我们一起来看看吧！
一、DNA文库构建的内容
（1）片段化及末端修复
（2）加接头
（3）PCR
注意：此处忽略磁珠纯化的步骤。
RNA样本的文库构建更加复杂，需将RNA逆转录为cDNA才能进行上述的建库流程，原理相同。
二、gDNA样本在NGS建库前要进行片段化的原因
Illumina测序仪可读取的片段长度范围在50-600bp（图1）, 不同测序芯片和测序试剂，对应测序长度不同。而大部分完整人类gDNA长度≥10kb。所以对于大片段的DNA/RNA样本，打断是文库构建的前提。(这个理由同样适用于MGI平台)
|
DNA测序应用 |
|
|
应用 |
推荐读长 |
|
全基因组测序 |
2 X 150 bp |
|
全外显子测序 |
2 X 150 bp |
|
靶向捕获测序 |
2 X 150 bp |
|
扩增测序 |
整个扩增子插入片段长度 |
|
从头测序 |
2 X 150 – 2 X 300 bp |
|
RNA测序应用 |
|
|
应用 |
推荐读长 |
|
转录组分析 |
2 X 75 bp |
|
基因表达谱分析 |
1 X 50 bp |
|
小RNA测序 |
1 X 50 bp |
图1.Illumina测序平台针对不同应用推荐的测序读长
三、DNA片段化后要加接头(adapter/index)的原因和意义
一个完整的接头包含三部分:通用引物(P5&P7) + index(i7/i5) + 测序引物(SP1&SP2)（图2）
1. 通用引物用于簇生成，测序引物用于插入片段的测序；
2. 测序平台决定接头序列;
3. index用于区分同一批测序数据的不同样本。当同一张芯片测序样本数≥2时，由index来区分样本。如果一张flow cell只上一个样本，index可以不需要，但是通用引物(P5&P7)和测序引物(SP1&SP2)是必需的。
备注：样本加上完整接头的方式有至少有3种，但是最终文库的接头序列是一致，找时间专门写一个接头不同结构与连接方式的文章。
图2 不同接头结构的文库
四、PCR和PCR-free两种文库的常见性问题
PCR是实现样本量的手段之一。当投入的起始量较低，构建的文库量较少，需要通过 PCR复制模板量，最终达到上机需求的量。反之，当样本起始量足够多的情况下，只需完成接头连接，纯化后即可上机测序。
但是PCR文库比较常见。
1. 大部分样本的起始量并不能直接满足上机需求
2. 不经过PCR扩增的文库，由于接头呈现Y型，其物理结构特殊，容易导致文库质控结果出现偏差
3. 接头与模板比例高，纯化不干净，导致文库的接头残留严重，降低整个文库质量
五、不同试剂盒对样本起始量要求不同
不同试剂盒会有不同的样本起始量要求。试剂盒能满足的样本起始量主要是由它自身酶的灵敏度、特异性以及稳定性决定的。样本起始量越低 (如新冠鼻咽拭子样本)，对酶的要求越高，相对的价格也越高。而且针对低起始量样本建库的试剂盒都有各自的技术zhuan利和优势，所以也是价格高的另一个原因。
更多有关NGS测序为什么需要文库构建的问题，请联系BioDynami NGS建库试剂盒代理商——上海金畔生物科技有限公司：
上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-SH 3.4k 脂质体聚乙二醇巯基 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05462
中文名：脂质体聚乙二醇巯基 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-SH 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-NHS 3.4k 脂质体聚乙二醇琥珀酰酯 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05461
中文名：脂质体聚乙二醇琥珀酰酯 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-NHS 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供DSPE-PEG-NH2 3.4k 脂质体聚乙二醇氨基或保护氨基 分子量MW 3400
品牌：
货号：JPB-05460
中文名：脂质体聚乙二醇氨基或保护氨基 分子量MW 3400
英文名：DSPE-PEG-NH2 3.4k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：3.4k/3400
分散度：《1.05
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