金畔生物提供外泌体（Exosome）电镜DLS/NTA粒径分析表征电镜测定服务

键词：外泌体（Exosome），TEM透射电镜，DLS/NTA 粒径分析，电镜DLS NTA，表征电镜测定

外泌体表征电镜测定技术简介：

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，指直径在40-100nm的盘状囊泡。密度在1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物液中。主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中，包括几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞)，都可以产生并释放exosome。目前外泌体提取主要有超速离心、过滤离心、试剂盒提取等方法。

实验流程

步骤一：外泌体戊二醛固定。

步骤二：清洗–用1mL PBS清洗3次，每次静置15min。

步骤三：e酸固定–加入0.5 mL 2%e酸溶液 4度固定2h。

步骤四：清洗–用1mL PBS清洗3次，每次静置15 min。

步骤五： 脱水–用50%、70%、80%、90%乙醇各1mL梯度脱水分别静置15min，再用1mL 100%乙醇脱水2次，每次20min。

步骤六：置换–用1mL丙酮置换2次，每次静置15min。

步骤七：浸渍。

步骤八：包埋–将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中。

步骤九：聚合–将包埋板置于65℃条件下聚合48h。

步骤十： 染色–醋酸双氧铀染色 10min后清洗；醋酸铅染色 10min后清洗。

步骤十一：上机检测。

步骤十二：提供实验报告。

外泌体表征电镜测定图谱展示：

服务说明及结果

客户提供：客户提供外泌体样本或由我司分离得到需要检测的外泌体。

公司提供：基本实验步骤、图片、数据分析结果。

实验检测周期：5-10个工作日。

外泌体概要

外泌体（Exosome）是指经由细胞内的囊泡运输，从多泡体(Multivesicular body，MVB) 排出到细胞外的直径为30～100 nm左右的细胞外囊泡（Extracellular vesicle，EV）。

外泌体的膜表面上多表达一种四次跨膜蛋白（Tetrasphaiin），已知CD9与CD63分子为一般外泌体的标志物。外泌体内部含有蛋白质、脂质、核酸等。被分泌到细胞外后，经由血液、尿液和唾液等体液被相邻或远离的组织吸收，从而发挥着细胞间信息传递载体的作用。

最近的研究证明外泌体中存在miRNA后，外泌体由来的miRNA的分析与细胞、组织特异性、以及与疾病间的联系引起了人们的广泛关注。现在，在以癌症等为代表的各类疾病中，利用外泌体由来的分子开发诊断试剂或将其作为药物开发靶点，或是将外泌体作为药物释放系统的工具加以利用，这些聚焦于外泌体的研究正在不断发展。

外泌体的分离方法

超速离心法

多聚物沉淀法

免疫沉淀法

方法

• 利用分子的大小比重物理法离心

• 使用多聚物的沉淀法

• 运用磁珠法特异性吸附外泌体表面抗原进行沉淀分离

优点

• 至今为止常用的方法

• 可大量提取

• 可使用的样品种类较多

• 低成本

• 操作简单

• 时间较短

• 不需要特别的仪器

• 操作简单

• 时间较短

• 杂质较少，纯度高

• 可以使用膜上蛋白对应的特异性抗体进行回收

缺点

• 操作比较繁杂，时间较长（半天～两天）

• 杂质较多

• 根据使用的离心管的材料，可能会因壁上的吸附造成损耗

• 较难同时检测不同样品

• 需要超速离心机

• 杂质较多

• 从血清血浆中回收外泌体需要分别使用不同的试剂进行回收

• 外泌体的回收效果依靠抗体的性能