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ALZET 渗透压泵(2002)中文说明书

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ALZET 渗透压泵(2002)中文说明书

产品英文名：Alzet MINI-OSMOTIC PUMP MODEL 2002

速率：0.5µl/h，14天(实际规格因批次而异)。

储存：室温储存。

组件：Alzet渗透泵(10个)、流量调节器(10个)、一次性填充管(1个)、说明书(1份)。

注意：不可用于人体；非兽医用；仅供实验室使用；研究动物或用于体外试验。

ALZET 渗透压泵是一种可植入式的、微型胶囊，适用于大鼠、小鼠及其他实验动物。该渗透压泵无需进行外部连接，也无需频繁动物处理，以恒定的速率持续给药。

一、ALZET 渗透泵(2002)基本描述

泵送率：0.5 μl/hr (± 0.1 μl/hr)；

持续时间：14 天,；

胶囊容量：200μl。

二、ALZET 渗透泵(2002)灌注方法和步骤

正确的灌注方法如下： 

1、空渗透泵以及它的流量调节器（总重） 称重；

2、利用27式灌装管以及1mL的注射器灌装渗透压泵。若使用较大注射器，由于灌装速度过快，可能会在胶囊中产生气泡。用注射器抽取药物溶液，装上灌装管。需要注意的是注射器和与其连接的灌装管之间不能有气泡。

3、拔掉流量调节器，将渗透压泵直立，从渗透压泵顶部的小开口插入灌流管，直到不能再插入为止。此时灌流管的jian端接近胶囊的底部。

4、保持渗透压泵直立，缓慢推注射器的活塞。当药物溶液到达胶囊顶部小开口处停止灌注，小心移去灌注管（速度快了可能会产生气泡）。

5、檫掉溢出的药物溶液，插入流量调节器直到白色帽子到达渗透压泵顶部为止。插入的流量调节器将会取代部分已经灌注到渗透压泵中的药物溶液，溢出的溶液需要擦干净。确保该装置正常运行，需要将流量调节器全部插进渗透压泵中。

6、称量灌满后的渗透压泵（连同流量调节器），步骤6和步骤1的差值为灌注的药物溶液的净重。对于大多数稀释的水溶液，重量（mg）=体积（µl）。灌注的体积应该大于平均灌注体积（Mean Fill Volume）的 90%，即 244.6*0.9=220.41。如果是这样的话，灌装后的渗透压泵就可以使用了，

如果不满足以上条件，说明渗透压泵中含有气泡，不能使用。 如果在灌注过程中阻力较大，可在灌注过程中将灌注管小角度翘起，灌注的小孔可通过来回移动灌注管而扩大，或者在插入灌注管之前多次插入及拔出流量调节器以达到扩大灌注孔的目的。

备注一：渗透压泵中有气泡或者不能正确将流量调节器插入胶囊将会导致不可预测的药物泵送率波动；

备注二：在灌注和植入过程中应戴手套；另外大量的油脂如果在皮肤表面聚积，可能会影响渗透压泵性能；如果渗透压泵被污染了，应用 70%的异丙醇擦拭，切忌不能用异丙醇浸泡；注意要在常温下灌注药物。

三、药物溶液与ALZET 渗透泵(2002)的兼容性

渗透压泵与水、稀释的酸、碱溶液以及与稀释的或低浓度的DMSO、酒精兼容，也与 100%丙烯和聚乙二醇兼容。ALZET渗透压泵与脂肪族，芳香烃类化合物不兼容，例如庚烷，甲苯，动植物油脂。使用不兼容的溶剂可能导致渗透压泵丧失功能。

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各种转染试剂的中文说明

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各种转染试剂的中文说明

各种转染试剂中文说明

 

一、PEI Prime Powder, Transfection Grade Linear Polyethylenimine(Serochem)转染步骤（以 HEK293 贴壁细胞为例）

1.细胞接种：细胞密度 2-6 x106 cells/mL.

2.质粒的准备：在 5％最终培养体积的 DMEM 或培养基中，每 10 6 个细胞稀释1.0 ug pDNA。

3. PEI 的准备：在 5％最终培养体积的 DMEM 或培养基中，每 10 6 个细胞稀释3.0 ug PEI Prime，混匀通过快速，短暂涡旋或颠倒数次试管，将 pDNA 和 PEI Prime 溶液混合在一起。

4. 使 pDNA 和 PEI 的混合物在室温下静置 10 分钟。一边旋转板，一边将 pDNA 和 PEI 混合物逐渐滴加到细胞中。

5.于 37℃ CO2 培养箱中培养。

二、Effectene Transfection Reagent(Qiagen) 转染步骤：

说明：以下步骤适用于在 6 孔培养板中转染贴壁细胞。开始时，每 6 孔培养板使用 0.4ug DNA。尽管 DNA 的量看起来很少，但已足够用于转染。如果想获得最高的转染效率，对每种细胞系的转染条件都要进行优化。

转染前一天，用 5ml 含血清和抗生素的培养基分装使每 6 孔培养板含 2-8×105的细胞（根据细胞类型而定）。在细胞的正常培养条件下培养（通常 37℃和 5％CO2）。转染当天细胞应 40–80％融合。转染时，用 DNA 浓缩缓冲液（EC Buffer）稀释 1ug DNA 至 100ul 总体积（DNA 用 pH 7-8 的 TE Buffer 溶解，DNA 浓度：0.1ug/ul）。加入 3.2ul Enhancer， 涡旋 1s 以混合溶液。

重要：请保持 DNA 与 Enhancer 比例恒定。

 注意：质粒 DNA 的质量会显著影响几个转染参数如转染效率、细胞增殖和细胞毒性、以及对于结果的解释。因此，只应该使用最高纯度的 DNA。室温（15-25℃）孵育 2-5 分钟，离心（spin down）几秒钟以从管顶去除液滴。向 DNA-Enhance 混合液中加入 10ul Effectene Transfection Reagent，反复吸取 5

次或涡旋 10 秒钟以混合。

注意：没必要一直把 Effectene Reagent 置于冰上。在室温中放置 10-15 分钟不会改变它的稳定性。

室温下（15-25℃）孵育 5-10 分钟以形成转染复合物。孵育过程中，从培养板上轻柔地吸出培养液，用 4ml PBS 洗涤一次细胞。加入1.6ml 新鲜培养液（可以包含血清和抗生素）到细胞中。加入 0.6ml 培养液（可以包含血清和抗生素）至包含转染转染复合物的 EP 管中。吸取两次以混合，立即将转染复合物 drop-wise 加入 6 孔培养板的细胞中。轻摇培养板使转染复合物分布均匀。将细胞与转染复合物在它们的正常培养条件下孵育适当的时间直至转染基因表达。孵育时间和由所采用的实验和所使用的基因决定。

Optional: 大多数情况下，不需去除转染复合物。然而，如果观察到细胞毒性，则需在转染后 6-18 小时移除 Effectene-DNA 混合物，用 PBS 洗涤一次细胞， 然后加入 5ml 新鲜细胞培养液。

瞬时转染时，进一步试验分析转染基因的表达。

转染β-gal 或 cat 报告基因的重组子常在转染后孵育 24-48 小时以使转染基因的表达。

稳定转染时，在转染后 24-48 小时，将细胞以 1:5~1:10 传代至合适的选择性培养基中。保持细胞在选择性培养基中直至克隆出现。

注意：我们推荐对每一细胞系和使用的抗生素建立一个致死曲线（剂量–反应曲线）。但是一定要记住致死曲线受细胞密度的影响。

以下步骤有时是必须的：将转染的细胞置于它们正常的培养液（如：不含选择性抗生素的培养液），然后孵育 1-2 天，然后再加入选择性培养液。