上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-OPSS 40k 异氰酸聚乙二醇邻二硫吡啶 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05886
中文名：异氰酸聚乙二醇邻二硫吡啶 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-OPSS 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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不同动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤是怎样的？
你知道不同动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤是怎样的吗？让我们一起来看看吧！
一、培养的贴壁动物细胞的蛋白质抽提步骤
1.从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。
2.预冷的 PBS 清洗贴壁的细胞 2 次，小心倾去 PBS。
3.配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液）。
4.细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂；5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂），轻轻摇动 5 分钟。
5.用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来，转移细胞悬浮液到离心管中，冰浴下摇动 15 分钟进行裂解。
6.裂解液于预冷的离心机中 14，000xg 离心 15 分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
二、培养的悬浮动物细胞的蛋白质抽提步骤
1.2500xg 离心 10 分钟沉淀悬浮的细胞，弃去上清液
2.预冷的 PBS 悬浮沉淀细胞，2500xg 离心 10 分钟沉淀细胞，去上清。
3.配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液）。
4.加入含抑制剂的预冷蛋白质抽提试剂（107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂；5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂）。
5.轻轻摇动混和 15 分钟进行裂解。
6.裂解液于预冷的离心机中 14，000xg 离心 15 分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
三、哺乳动物组织的蛋白质抽提步骤
1.组织称重，切小块放入管中。
2.配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF 和 5ul 磷酸酶混合液）。
3.加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（250mg 组织中加入 1ml 抽提试剂）。
4.用匀浆器每次 30 秒低速匀浆，每次匀浆间隔冰浴 1 分钟，至组织wan全裂解。
5.裂解液于预冷的离心机中 14，000xg 离心 15 分钟。上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
更多有关动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤，请联系上海金畔生物科技有限公司：
【简单介绍】
【详细说明】
上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-SPDP 40k 异氰酸聚乙二醇3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05885
中文名：异氰酸聚乙二醇3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-SPDP 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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Merck Millipore再生纤维素超滤膜PLTK圆片型超滤膜30KD
Merck Millipore再生纤维素超滤膜PLTK圆片型超滤膜30KD PLTK04310
要对稀释溶液进行浓缩或脱盐，请使用 Ultracel 再生纤维素膜。 超滤膜的亲水性、致密微孔结构对蛋白质、DNA 或其它大分子具有zui低的吸附率，从而保证了zui高的截留率。
PLTK04310：Ultracel PLTK 圆片型超滤膜，再生纤维素，30 kDa NMWL，44.5 mm，10张每盒。
上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-Allyl 40k 异氰酸聚乙二醇丙烯基 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05884
中文名：异氰酸聚乙二醇丙烯基 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-Allyl 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-ALD 40k 异氰酸聚乙二醇丙醛 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05883
中文名：异氰酸聚乙二醇丙醛 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-ALD 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-acryloyl 40k 异氰酸聚乙二醇丙烯酸 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05882
中文名：异氰酸聚乙二醇丙烯酸 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-acryloyl 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-SPA 40k 异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05881
中文名：异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-SPA 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-PA 40k 异氰酸聚乙二醇丙酸 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05880
中文名：异氰酸聚乙二醇丙酸 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-PA 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-SCM 40k 异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺乙酸酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05879
中文名：异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺乙酸酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-SCM 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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质粒构建实验影响因素有哪些？
质粒构建是指选定的目的外源基因（DNA）先要经过PCR扩增。随后用限制性内切酶分别切割载体和外源DNA片段，再使用DNA连接酶将切割后的载体与DNA片段连接，转入宿主细胞。最后经过筛选鉴定出正确的重组克隆质粒，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。那么质粒构建实验影响因素有哪些呢？让我们一起来看看吧！
一、载体的选择
在选择克隆载体时应注意以下几点：
①具有自主复制能力，拷贝数高；
②携带易于筛选的选择标记；
③含有多种限制酶的单一识别序列，以供外源基因插入；
④载体应尽可能小（＜15kb），便于导入细胞和进行繁殖；
⑤使用安全。克隆载体应只存在于有限范围的宿主内，在宿主体内不进行重组，不发生转移，不产生有害性状，并且不能离开工程宿主自由扩散。
二、引物设计注意事项
在构建质粒时，设计引物时应该考虑引物长度、引物的GC含量、引物的Tm值等因素，并避免引物间出现配对突变或二次结构等情况。
前向引物：5’端 — 上游克隆载体末端同源序列 + 基因正向扩增引物 –3’端
反向引物：3’端 — 基因反向扩增引物 + 下游克隆载体末端同源序列 –5’端
运用PCR扩增目的基因的过程中，引物设计注意事项：
① 引物长度最好在18-30bp左右，常用的长度是 20-22bp；
②引物 Tm 值最好在 60℃ 左右，两条引物间 Tm 值要保持接近，相差最好不要超过 5°C；
③GC 的含量标准通常为 40%-60% 或45-55%；
④引物自身不应含有连续超过4个的互补的碱基，避免形成发卡结构或形成引物二聚体；
⑤引物的3’端要避免出现连续重复的碱基，如 GGG 或 CCC ，这会导致错配的发生，最后一个碱基最好是 G 或 C；
⑥在引物的 5’端添加酶切位点时（在不影响扩增的特异性的前提下），根据酶切位点序列，需要添加不同种类和数量的保护碱基，通常多加3个碱基即可满足保护酶切位点的需求；
⑦上下游引物最好加入不同的酶切位点，相同的酶切位点可能导致目的基因片段出现倒置连接现象，影响基因序列的正常表达。
三、酶切位点的选择
选择合适的剪切酶和连接酶对于质粒构建至关重要。剪切酶的选择应该考虑酶切位点的位置、酶的反应条件等因素。连接酶的选择应该根据所用的质粒载体和目的基因的大小来确定。
①选择质粒上两个酶切位点的距离不应小于太小（>10bp），否则影响限制性内切酶对切点的识别，不利于空载体的双酶切。
②一般目的基因用于克隆表达的情况下，酶切位点的选择要考虑到：
目的基因片段内部不含有所选的酶切位点（不然鉴定阳性重组子双酶切时会将目的基因切断）。
③实验后继应用的所有载体（真核、原核、酵母、昆虫）都尽可能含有所选的酶切位点。并且要保证在载体上的插入方向正确（定向克隆）。（不然换载体表达时，还要重新设计引物，以引进新的酶切位点）。
④尽可能选比较常用的酶切位点（常用切点酶的价格比较便宜）。
⑤两个酶切点至少隔上3个碱基。
⑥两个酶切点最好不要是同尾酶（切下来的残基不要互补），否则效果相当于单酶切。
⑦最好使用酶切效率高的酶。
⑧最好使用双酶切有共同buffer的酶。
⑨在操作酶切连接的步骤时也要定性定量，保证酶活性充足。
更多有关质粒构建质粒构建实验的影响因素，请联系上海金畔生物科技有限公司：
上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-SS 40k 异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05878
中文名：异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-SS 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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【简单介绍】
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默克密理博Ultracel PLAC 圆片型超滤膜1KD（再生纤维素）PLAC04310
默克密理博Ultracel PLAC 圆片型超滤膜1KD（再生纤维素）PLAC04310
Ultracel PLAC 圆片型超滤膜，再生纤维素，1 kDa NMWL，44.5 mm，货号PLAC04310，10张每盒。
要对稀释溶液进行浓缩或脱盐，请使用 Ultracel 再生纤维素膜。 超滤膜的亲水性、致密微孔结构对蛋白质、DNA 或其它大分子具有zui低的吸附率，从而保证了zui高的截留率。
上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-SG 40k 异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05877
中文名：异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-SG 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-SC 40k 异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05876
中文名：异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-SC 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-SVA 40k 异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05875
中文名：异氰酸聚乙二醇琥珀酰亚胺戊酸酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-SVA 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-NHS 40k 异氰酸聚乙二醇羟基琥珀酰亚胺酯 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05874
中文名：异氰酸聚乙二醇羟基琥珀酰亚胺酯 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-NHS 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
分散度：《1.05
包装：1克/5克/10克
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上海金畔生物科技有限公司提供NCO-PEG-Thiol 40k 异氰酸聚乙二醇巯基 分子量MW 40000
品牌：
货号：JPB-05873
中文名：异氰酸聚乙二醇巯基 分子量MW 40000
英文名：NCO-PEG-Thiol 40k
端基取代率：》95%
纯度：》95%
分子量：40k/40000
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