质粒纯化需要注意的要点有哪些呢?

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质粒纯化需要注意的要点有哪些呢?

质粒是小的环状超螺旋双链 DNA,在宿主细胞内独立于染色体外自主复制并稳定遗传,可通过基因工程改造接入外源 DNA 作为基因载体,转入宿主细胞。如今,质粒已成为生物制药领域中最重要的工具之一,可用于克隆,扩增和表达目的蛋白;也可用于病毒载体和 mRNA 的生产等领域。质粒纯化是大多数分子生物学实验室的常用技术。虽然标准的碱裂解方法已经很成熟,但仍然可能出现令人惊讶的问题。那么,你知道质粒纯化需要注意的要点有哪些呢?一起来探究一下吧!
忽略质粒的拷贝数
同一大肠杆菌母株的质粒产量可能因多种因素而有很大差异。然而,质粒的复制起点将发挥重要作用,因为它将决定每个大肠杆菌细胞的质粒拷贝数  。因此,根据质粒的拷贝数,可能需要扩大质粒制备规模或进行多次质粒制备,以获得足够的质粒DNA供下游应用使用。
忘记在培养物中添加抗生素
如果忘记在培养物中添加抗生素或添加太少,则可能导致质粒丢失。确保仔细检查培养物中抗生素的浓度。
忽略透气重要性
大肠杆菌培养物通常在瓶中生长,需要适当的通气才能实现最佳生长。通常需要以 200-250rpm的速度摇动培养物。此外,考虑通过最小培养物与空气体积比约为 1:5 来增加培养物通气,使用棉塞或透氧膜等确保培养物获得足够的通气。
过量培养
另一种情况是越多并不是越好,如果培养生长时间过长会导致基因组DNA污染。最好在接种后约 12-18 小时处理细胞。
测量OD600
OD600是估算培养物密度的好方法,以便您知道何时处理细胞。由于高光密度无法测量,因此取一份培养物,稀释十倍并使用标准分光光度计进行测量。培养物已准备好以0.2-0.35的OD600处理十倍稀释的培养物。
不要超出负载
许多质粒制备试剂盒都附带有关培养条件的建议。请仔细遵循这些步骤,以确保裂解纯化柱不会过载。添加过多的培养物肯定会降低裂解物的质量、堵塞纯化柱并降低纯化性能。
操作要清柔
正确纯化质粒的关键之一是将基因组DNA与质粒DNA分离。可以通过移液或涡旋将细菌沉淀重悬于P1缓冲液中。然而,在裂解过程中不能过度混合,因为您可能会剪切基因组DNA,而基因组DNA会与柱基质结合并污染您的质粒。
忽略裂解时间
有些人可能认为裂解时间越长越好,然而大肠杆菌的碱裂解时间过长会产生大量非质粒碎片。此外,不同菌株的大肠杆菌对碱裂解的敏感性也不同。最重要的是,裂解时间过长可能会导致质粒 DNA 变性,从而导致制备质量差。
wan全中和裂解物
添加中和溶液并与裂解液混合后,不要立即进行下一步!中和不wan全可能导致制备质量差。确保多次翻转试管以确保裂解物wan全中和。即使观察到大的蓬松沉淀物,也需要多一点时间以确保溶液wan全混合。
防止细胞碎片杂质
中和步骤后,许多质粒制备物需要离心以将 DNA 与细胞碎片分离,从而澄清裂解物。在此步骤中,重要的是要缓慢进行,并避免将不必要的细胞碎片转移到下一步,这可能会干扰结合和/或降低纯度。
记得添加酒精
许多质粒制备试剂盒包含使用乙醇的洗涤缓冲液。这些缓冲液通常为浓缩液,使用前必须用乙醇稀释。这是一个常见的错误,经常被遗忘并导致准备失败。另外,不要忘记确保拧紧盖子以防止乙醇蒸发。
P2加热缓冲液
下游转化问题的一个常见原因是盐和蛋白质的污染。确保每次纯化后测量A 260/A280和A260/A230比率,高于1.8的比率通常被认为是纯净且不含污染物的。
不要一次处理太多样品
虽然可以最大限度地提高时间效率,但质粒纯化中的某些步骤对时间敏感。不要尝试一次处理太多样本,否则某些准备工作可能会放置太久而失效。
不要忘记热洗脱
如果质粒>10 kb,请考虑使用加热至50°C的洗脱缓冲液,以提高从柱基质上洗脱的效率。此外,离心前可以将洗脱缓冲液留在柱上5-10分钟。
以上就是小编总结的质粒纯化需要注意的要点,如果你有更多补充请联系上海金畔生物科技有限公司客服!

质粒构建实验影响因素有哪些?

质粒构建实验影响因素有哪些?

质粒构建是指选定的目的外源基因(DNA)先要经过PCR扩增。随后用限制性内切酶分别切割载体和外源DNA片段,再使用DNA连接酶将切割后的载体与DNA片段连接,转入宿主细胞。最后经过筛选鉴定出正确的重组克隆质粒,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。那么质粒构建实验影响因素有哪些呢?让我们一起来看看吧!

一、载体的选择

在选择克隆载体时应注意以下几点:

①具有自主复制能力,拷贝数高;

②携带易于筛选的选择标记;

③含有多种限制酶的单一识别序列,以供外源基因插入;

④载体应尽可能小(<15kb),便于导入细胞和进行繁殖;

⑤使用安全。克隆载体应只存在于有限范围的宿主内,在宿主体内不进行重组,不发生转移,不产生有害性状,并且不能离开工程宿主自由扩散。

二、引物设计注意事项

在构建质粒时,设计引物时应该考虑引物长度、引物的GC含量、引物的Tm值等因素,并避免引物间出现配对突变或二次结构等情况。

前向引物:5’端 — 上游克隆载体末端同源序列 + 基因正向扩增引物 –3’端

反向引物:3’端 — 基因反向扩增引物 + 下游克隆载体末端同源序列 –5’端

运用PCR扩增目的基因的过程中,引物设计注意事项:

① 引物长度最好在18-30bp左右,常用的长度是 20-22bp;

②引物 Tm 值最好在 60℃ 左右,两条引物间 Tm 值要保持接近,相差最好不要超过 5°C;

③GC 的含量标准通常为 40%-60% 或45-55%;

④引物自身不应含有连续超过4个的互补的碱基,避免形成发卡结构或形成引物二聚体;

⑤引物的3’端要避免出现连续重复的碱基,如 GGG 或 CCC ,这会导致错配的发生,最后一个碱基最好是 G 或 C;

⑥在引物的 5’端添加酶切位点时(在不影响扩增的特异性的前提下),根据酶切位点序列,需要添加不同种类和数量的保护碱基,通常多加3个碱基即可满足保护酶切位点的需求;

⑦上下游引物最好加入不同的酶切位点,相同的酶切位点可能导致目的基因片段出现倒置连接现象,影响基因序列的正常表达。

三、酶切位点的选择

选择合适的剪切酶和连接酶对于质粒构建至关重要。剪切酶的选择应该考虑酶切位点的位置、酶的反应条件等因素。连接酶的选择应该根据所用的质粒载体和目的基因的大小来确定。

①选择质粒上两个酶切位点的距离不应小于太小(>10bp),否则影响限制性内切酶对切点的识别,不利于空载体的双酶切。

②一般目的基因用于克隆表达的情况下,酶切位点的选择要考虑到:

目的基因片段内部不含有所选的酶切位点(不然鉴定阳性重组子双酶切时会将目的基因切断)。

③实验后继应用的所有载体(真核、原核、酵母、昆虫)都尽可能含有所选的酶切位点。并且要保证在载体上的插入方向正确(定向克隆)。(不然换载体表达时,还要重新设计引物,以引进新的酶切位点)。

④尽可能选比较常用的酶切位点(常用切点酶的价格比较便宜)。

⑤两个酶切点至少隔上3个碱基。

⑥两个酶切点最好不要是同尾酶(切下来的残基不要互补),否则效果相当于单酶切。

⑦最好使用酶切效率高的酶。

⑧最好使用双酶切有共同buffer的酶。

⑨在操作酶切连接的步骤时也要定性定量,保证酶活性充足。

更多有关质粒构建质粒构建实验的影响因素,请联系上海金畔生物科技有限公司:

DNA质粒提取的原理是什么?

DNA质粒提取的原理是什么?

在没有质粒提取试剂盒之前,大多提取质粒都是自己配置试剂来提取大肠杆菌中的质粒。现在的试剂盒只是改了一个名字而已,试剂还是那几个试剂。用的原理还是那个原理:碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。那么你知道DNA质粒提取的原理是什么吗?让我们一起来看看吧!

一、为什么用无水乙醇沉淀DNA?

用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇不与核酸起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易亍聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。

二、在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1~0.25mol/L?

在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不wan全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。

三、加核糖核酸酶降解核糖核酸后,为什么再要用SDS与KAc来处理?

加进去的RNase本身是一种蛋白质,为了纯化DNA,又必须去除之,加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀,再加KAc使这些复合物转发为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物,使沉淀更加wan全。也可用饱和酚、氯仺抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到较好效果

更多有关DNA质粒提取原理的问题,请联系Zymo试剂盒代理商——上海金畔生物科技有限公司:

Zymo酵母菌质粒纯化试剂盒系列介绍

Zymo酵母菌质粒纯化试剂盒系列介绍

质粒DNA纯化是许多分子生物学和生物化学实验室的基石。此外,它在各种应用之前被广泛使用。其中一些应用是转染、细菌转化、限制性内切酶消化、聚合酶链式反应、测序和体外转录。

良好的质粒纯化试剂盒可以有力地分离出高质量、无内毒素的质粒DNA。最hao的试剂盒可以快速完成这项工作,并使用简单的协议。当然,快速简单的质粒纯化试剂盒是每个研究人员武qi库中不可huo缺的工具。

Zymo Research以实惠的价格提供无与lun比的质粒DNA纯化试剂盒。因此,每个实验室都可以配备必需品。有几种形式可用于分离细菌质粒、酵母质粒或BAC、YAC和PAC DNA。使用Zymo技术分离的高质量质粒可以在水中直接从柱中洗脱。最重要的是,超纯DNA已经为所有敏感的下游应用做好了准备。

产品列表:

1. Zymoprep Yeast Plasmid Miniprep I kit

Zymoprep Yeast Plasmid Miniprep I kit是一种简单有效的酵母质粒小提试剂盒,其基于大肠杆菌碱性裂解方法,但使用酶作为第一溶液。该试剂盒提供了从酿酒酵母、白色念珠菌和绒球酵母以及细胞壁易受酵母裂解酶影响的任何真菌中分离质粒所需的所有试剂。该方法简单有效,不需要玻璃珠或苯酚。从酵母菌落、平板上的贴片或液体培养物中可靠地回收质粒DNA。该系统是低拷贝数和难以分离质粒的理想选择。洗脱的质粒DNA可直接用于大肠杆菌转化、PCR和Southern印迹分析。

Cat #

Name

Size

D2001

Zymoprep Yeast Plasmid Miniprep I

100 Preps

2. Zymoprep Yeast Plasmid Miniprep II kit

Zymoprep Yeast Plasmid Miniprep II kit是一种简单有效的酵母质小提试剂盒,其基于大肠杆菌碱性裂解方法,但使用酶作为第一溶液。该试剂盒提供了从酿酒酵母、白色念珠菌和绒球酵母以及细胞壁易受酵母裂解酶影响的任何真菌中分离质粒所需的所有试剂。该方法简单有效,不需要玻璃珠或苯酚。Zymoprep II回收的质粒DNA比Zymoprep I多约5倍,并且消除了异丙醇沉淀步骤。从酵母菌落、平板上的贴片或液体培养物中可靠地回收质粒DNA。该系统是低拷贝数和难以分离质粒的理想选择。洗脱的质粒DNA可直接用于大肠杆菌转化、PCR和Southern印迹分析。

Cat #

Name

Size

D2004

Zymoprep Yeast Plasmid Miniprep II

50 Preps

3. Zymoprep-96 Yeast Plasmid Miniprep kit

Zymoprep-96 Yeast Plasmid Miniprep kit为从酿酒酵母、白色念珠菌、绒球酵母和细胞壁易受酵母裂解酶裂解影响的任何真菌中高通量分离质粒提供了所有必要的试剂。Zymoprep-96是一种简单有效的酵母质粒小型制备试剂盒,它基于经典的大肠杆菌碱性裂解方法,在第一种溶液中加入Zymo的酶。不需要玻璃珠或苯酚。Zymoprep-96将Zymoprep II试剂盒合并到96孔的形式中,从而产生了一种高通量方法,该方法回收的质粒DNA比Zymoprep I多约5倍,并且消除了异丙醇沉淀步骤。从酵母菌落、平板上的贴片或液体培养物中可靠地回收质粒DNA。该系统是低拷贝数和难以分离质粒的理想选择。洗脱的质粒DNA可直接用于大肠杆菌转化、PCR和Southern印迹分析。

Cat #

Name

Size

D2005

Zymoprep-96 Yeast Plasmid Miniprep

2 x 96 Preps

D2006

Zymoprep-96 Yeast Plasmid Miniprep

4 x 96 Preps

D2007

Zymoprep-96 Yeast Plasmid Miniprep

8 x 96 Preps

更多有关Zymo酵母菌质粒纯化试剂盒的介绍,请联系上海金畔客服!

Zymo大肠杆菌质粒纯化试剂盒系列产品介绍

Zymo大肠杆菌质粒纯化试剂盒系列产品介绍


质粒DNA纯化是许多分子生物学和生物化学实验室的基石。此外,它在各种应用之前被广泛使用,如转染、细菌转化、限制性内切酶消化、聚合酶链式反应、测序和体外转录等。

良好的质粒纯化试剂盒可以有力地分离出高质量、无内毒素的质粒DNAZymo Research以实惠的价格提供无与lun比的质粒DNA纯化试剂盒。使用Zymo技术分离的高质量质粒可以在水中直接从柱中洗脱。最重要的是,超纯DNA已经为所有敏感的下游应用做好了准备。

产品分类:

一、Miniprep系列

二、Midiprep系列

三、Maxiprep/Gigaprep系列

四、High-Throughput系列

五、BAC/YAC/PAC系列(DNA200KB)

产品列表:

一、Miniprep系列

1. ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit采用基于旋转柱的方法,在不到15分钟的时间内纯化高达100µg的超纯无内毒素质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4212

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

800 Preps

D4211

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

400 Preps

D4210

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

100 Preps

D4208T

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

10 Preps

D4209

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

50 Preps

2. Zyppy Plasmid Miniprep Kit

Zyppy Plasmid Miniprep Kit是一种质粒DNA试剂盒,其特点是无颗粒的改良碱性裂解系统,绕过了经典质粒制备程序中常见的正常细胞颗粒化和再悬浮步骤。

Cat #

Name

Size

D4019

Zyppy Plasmid Miniprep Kit

100 Preps

D4020

Zyppy Plasmid Miniprep Kit

400 Preps

D4036

Zyppy Plasmid Miniprep Kit

50 Preps

D4037

Zyppy Plasmid Miniprep Kit

800 Preps

3.  ZR Plasmid Miniprep – Classic

ZR Plasmid Miniprep – Classic计用于使用简单、快速和可靠的传统3-缓冲液(P1P2P3)程序从大肠杆菌中有效分离质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4054

ZR Plasmid Miniprep – Classic

800 Preps

D4015

ZR Plasmid Miniprep – Classic

100 Preps

D4016

ZR Plasmid Miniprep – Classic

400 Preps

4.  ZR BAC DNA Miniprep Kit

ZR BAC DNA Miniprep Kit使用简单、快速、用户友好和可靠的程序,从大肠杆菌中有效分离BAC质粒DNA或其他大质粒(如PAC)。

Cat #

Name

Size

D4048

ZR BAC DNA Miniprep Kit

25 Preps

D4049

ZR BAC DNA Miniprep Kit

100 Preps

二、Midiprep系列

1.ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit

ZymoPURE II Plasmid Midiprep kit提供了最快、最jian单的方法,可以有效地从大肠杆菌中分离出高达1.2mg的转染级质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4200

ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit

25 Preps

D4201

ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit

50 Preps

2. ZymoPURE – Express Plasmid Midiprep Kit

ZymoPURE – Express Plasmid Midiprep kit利用一种获得专li的碱性裂解方法,直接从大肠杆菌培养物中纯化高达1.2 mg的转染级质粒DNA,而无需常规的细胞造粒和重悬浮步骤。

Cat #

Name

Size

D4213

ZymoPURE – Express Plasmid Midiprep Kit

25 Preps.

Maxiprep/Gigaprep系列

1. ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit

ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit提供了最快、最jian单的方法,可以有效地从大肠杆菌中分离出高达3mg的转染级质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4203

ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit

20 Preps

D4202

ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit

10 Preps

2. ZymoPURE II Plasmid Gigaprep Kit

ZymoPURE II Plasmid Gigaprep kit提供了最快、最jian单的方法,可以有效地从大肠杆菌中分离出高达25mg的转染级质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4204

ZymoPURE II Plasmid Gigaprep Kit

5 Preps

四、High-Throughput系列

1.Zyppy-96 Plasmid Kit

Zyppy-96 Plasmid Miniprep kit是最快、最jian单的高通量质粒DNA试剂盒,可用于从大肠杆菌中有效分离质粒DNA。这种质粒DNA试剂盒的特点是无颗粒的改良碱性裂解系统。

Cat #

Name

Size

D4041

Zyppy-96 Plasmid Kit

2 x 96 Preps

D4042

Zyppy-96 Plasmid Kit

4 x 96 Preps

D4043

Zyppy-96 Plasmid Kit

8 x 96 Preps

2. Zyppy-96 Plasmid MagBead Miniprep kit

Zyppy-96 Plasmid MagBead Miniprep kit是最快的高通量(96孔)无颗粒质粒DNA试剂盒,可用于从大肠杆菌中有效分离质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4100

Zyppy-96 Plasmid MagBead Miniprep

2 x 96 Preps

D4101

Zyppy-96 Plasmid MagBead Miniprep

4 x 96 Preps

D4102

Zyppy-96 Plasmid MagBead Miniprep

8 x 96 Preps

五、BAC/YAC/PAC系列(DNA200KB)

1. ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit采用基于旋转柱的方法,在不到15分钟的时间内纯化高达100µg的超纯无内毒素质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4212

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

800 Preps

D4211

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

400 Preps

D4210

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

100 Preps

D4208T

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

10 Preps

D4209

ZymoPURE Plasmid Miniprep Kit

50 Preps

2. ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit

ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit提供了最快、最jian单的方法,可以有效地从大肠杆菌中分离出高达1.2mg的转染级质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4200

ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit

25 Preps

D4201

ZymoPURE II Plasmid Midiprep Kit

50 Preps

3. ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit

ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit提供了最快、最jian单的方法,可以有效地从大肠杆菌中分离出高达3mg的转染级质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4203

ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit

20 Preps

D4202

ZymoPURE II Plasmid Maxiprep Kit

10 Preps

4. ZymoPURE II Plasmid Gigaprep Kit

ZymoPURE II Plasmid Gigaprep kit提供了最快、最jian单的方法,可以有效地从大肠杆菌中分离出高达25mg的转染级质粒DNA

Cat #

Name

Size

D4204

ZymoPURE II Plasmid Gigaprep Kit

5 Preps

5. ZymoPURE – Express Plasmid Midiprep Kit

ZymoPURE – Express Plasmid Midiprep kit利用一种获得专li的碱性裂解方法,直接从大肠杆菌培养物中纯化高达1.2 mg的转染级质粒DNA,而无需常规的细胞造粒和重悬浮步骤。

Cat #

Name

Size

D4213

ZymoPURE – Express Plasmid Midiprep Kit

25 Preps

6. ZR BAC DNA Miniprep Kit

ZR BAC DNA Miniprep Kit使用简单、快速、用户友好和可靠的程序,从大肠杆菌中有效分离BAC质粒DNA或其他大质粒(如PAC)。

Cat #

Name

Size

D4048

ZR BAC DNA Miniprep Kit

25 Preps

D4049

ZR BAC DNA Miniprep Kit

100 Preps

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250

简要描述:
Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250, 质粒小量制备试剂盒:采用快速、高效的方法,通过小量制备管的形式纯化质粒DNA。每管适合从多至4 ml LB细菌培养物或2 ml肉汤培养物中提取质粒DNA。整个过程不超过20 min,纯化后的质粒DNA可直接适用于测序、限制性酶切、体外转录与翻译、构建分子文库、细菌转化等。

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250 质粒小量制备试剂盒:采用快速、高效的方法,通过小量制备管的形式纯化质粒DNA。每管适合从多至4 ml LB细菌培养物或2 ml肉汤培养物中提取质粒DNA。整个过程不超过20 min,纯化后的质粒DNA可直接适用于测序、限制性酶切、体外转录与翻译、构建分子文库、细菌转化等。

 

A 的详细介绍

质粒小量制备试剂盒:采用快速、高效的方法,通过小量制备管的形式纯化质粒DNA。每管适合从多至4 ml LB细菌培养物或2 ml肉汤培养物中提取质粒DNA。整个过程不超过20 min,纯化后的质粒DNA可直接适用于测序、限制性酶切、体外转录与翻译、构建分子文库、细菌转化等。
质粒小量制备试剂盒

产品特性:

  1. 三种不同的规格提取高纯的质粒DNA
  2. 适用于多种用途
  3. 高得率
  4. 无需乙醇沉淀
  5. 快速的离心法或负压法产品特性

流程图

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250

 

 

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250

 

DNA 序列分析  ( Terminator chenistry,   ABI PRISM 3730测序仪) 

 

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250

 

AxyPrep 质粒小量试剂盒纯化不同大小的质粒DNA,0.5ugDNA/泳道。 

Lane 1:3Kb       Lane 2:4 Kb 

Lane 3:4.9 Kb       Lane 4:5 Kb 

Lane 5:5.9 Kb       Lane 6:6 Kb

Lane 7:8 Kb       Lane 8:10 Kb

M:Axygen 1Kb DNA Ladder

 

Axygen质粒小量制备试剂盒AP-MN-P-250  

AxyPrep 质粒小量试剂盒纯化质粒pET42.1a(插入片段) 

Lane 1,3:pET42.1a  (0.3 ug/泳道)

Lane 2,4:EcoR I 酶切(0.3 ug/泳道) 

M: Axygen 1Kb DNA Ladder

Zymo质粒中提试剂盒

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Zymo质粒中提试剂盒

详情介绍

Zymo质粒中提试剂盒简介:

Zymo质粒中提试剂盒提供了从大肠杆菌中有效分离高达1.2mg转染级质粒DNA的最kuai和zui简单的方法。ZymoPURE II Midiprep试剂盒利用改良的碱性裂解和zhuan li结合系统可以在不到18分钟的时间内处理多达50毫升的培养物。Zymo质粒中提试剂盒产生了显著更多的质粒DNA,同时大大缩短了处理时间。质粒DNA用真空或离心机而不是慢速重力流柱快速结合到柱上。此外,不需要醇沉淀步骤,并且使用微型离心机进行洗脱。回收的质粒DNA高度浓缩(高达6µg/µl),不含内毒素,可进行转染。为了增加便利性,Zymo质粒中提试剂盒包含彩色缓冲液,可以无错误地可视化和识别wan quan的细菌细胞裂解和中和。

Zymo质粒中提试剂盒代理——上海金畔生物科技有限公司,成立于2017年,由经验丰富的技术团队、商业团队及管理团队组建而成,专注于免疫学、细胞生物学、分子生物学等领域核心试剂产品的研发、生产与销售基于“客户第一”的核心理念,上海金畔在产品自主研发的同时,也与全球多家生命科学试剂供应商建立良好的合作关系,向全球10,000+客户提供200,000+优质产品。上海金畔将以品质树立品牌,以服务赢得口碑,致力于成长为重要的生物化学试剂开发与成果转化的kai tuo zhe,并成为行业ling xian的优质品供应商。

Zymo质粒提取试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供Zymo质粒提取试剂盒 ,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
Zymo质粒提取试剂盒

详情介绍

一、ZymoPURE™ 质粒DNA提取(小提/中提)

产品特点:
• 操作简便,快速:抽提时间 <20min;创新 Zymo-Spin ™ Column( 硅胶膜柱 ) 设计,可通过抽真空或离心完成快速结合;
包含注射过滤器,用于快速清除菌体碎片;
• 产物质量高;ZymoPURE ™硅胶膜柱结合技术,可获得高浓度质粒 DNA,可达 3 μg/ul,适用于下游各种应用;通过一步漂洗来去除内毒素、盐类、蛋白和 RNA,获得高纯度转染级别质粒 DNA
• 所有组分具有颜色标识,过程可视;

产品列表:

产品名称 货号 规格 产品描述
ZymoPURE™ Plasmid Miniprep Kit
质粒小提
D4209 50次 样本量:5ml;
时间:≤ 15min
ZymoPURE™ Plasmid Miniprep Kit
质粒小提
D4210 100次 洗脱体积:≥ 25μl;
产量:≤ 100μl
ZymoPURE-Express™ Plasmid
Midiprep Kit 快速质粒中提
D4213 25次 样本量:25mL; 时间:15min
洗脱体积:≥ 200μl; 产量:≤ 1.2mg
Zyppy™ Plasmid Miniprep Kit
质粒小提

D4019 

D4020

100次
400 次
样本量:600μl-3mL;时间:8min
洗脱体积:≥ 30μl; 产量:≤ 25μg

二、ZymoPURE™超低内毒素质粒DNA处理

产品特点:
• 操作超快!内毒素超低!产量超高!
• 采用du te的EndoZero™-spin 柱技术去内毒素,不用长时间孵育;
• 操作时间 <20min,内毒素残留≤ 0.025EU/μg;
• 产物浓度高,可达 3μg/ul,可直接用于下游实验。

产品列表:

产品名称 货号 规格 产品描述
ZymoPURE™ Plasmid Midiprep Kit
质粒中提
D4200 25次 样本量:50ml;
时间:≤ 18min
ZymoPURE™ Plasmid Midiprep Kit
质粒中提
D4201 50次 洗脱体积:≥ 100μl;
产量:≤ 300μg
ZymoPURE™ Plasmid Maxiprep Kit
质粒大提
D4202 10次 样本量:150ml;
时间:≤ 18min
ZymoPURE™ Plasmid Maxiprep Kit
质粒大提
D4203 20 次 洗脱体积:≥ 200μl
产量:≤ 1.2mg
ZymoPURE™ Plasmid Gigaprep Kit
质粒巨提
D4204 5次 样本量:2.5L;时间:50min

洗脱体积:≥ 2ml

产量:≤ 10mg

Zymo质粒纯化提取试剂盒

上海金畔生物科技有限公司提供Zymo质粒纯化提取试剂盒 ,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
Zymo质粒纯化提取试剂盒

详情介绍

Zymo质粒纯化提取试剂盒——ZymoPURETMIl Plasmid Purification kit产品优势:

(1)仅16分钟完成质粒中量/大量提取步骤

(2)高浓度转染级质粒

(3)高达6倍的质粒DNA浓度

(4)多达3倍的质粒DNA产量

(5)转染级质粒的可靠验证

Zymo质粒纯化提取试剂盒相关产品列表:

产品名称 货号 规格 产品说明

ZymoPURETMIl 

质粒纯化中量提取试剂盒

D4200

D4201

25次

50次

样品输入量:50ml

最大结合量:1.2mg

内毒素:0.025EU/μg

ZymoPURETMIl 

质粒纯化大量提取试剂盒

D4202

D4203

10次

20次

样品输入量:150ml

最大结合量:3.0mg

内毒素:0.025EU/μg

ZymoPURETMIl 

质粒纯化超大量提取试剂

D4204 5次

样品输入量:2.5L

最大结合量:25mg

内毒素:0.025EU/μg

Zymo质粒纯化提取试剂盒代理——上海金畔生物科技有限公司,成立于2017年,由经验丰富的技术团队、商业团队及管理团队组建而成,专注于免疫学、细胞生物学、分子生物学等领域核心试剂产品的研发、生产与销售基于“客户第一”的核心理念,上海金畔在产品自主研发的同时,也与全球多家生命科学试剂供应商建立良好的合作关系,向全球10,000+客户提供200,000+优质产品。上海金畔将以品质树立品牌,以服务赢得口碑,致力于成长为重要的生物化学试剂开发与成果转化的kai tuo zhe,并成为行业ling xian的优质品供应商。

PlasmidFactory质粒代理商

上海金畔生物科技有限公司是PlasmidFactory质粒代理商 ,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
PlasmidFactory质粒代理

详情介绍

PlasmidFactory质粒代理:

PlasmidFactory GmbH是一家全球活跃的生物制药公司,于2000年在德国比勒费尔德成立。它是质粒和小圆环DNA的ling xian合同制造组织(CMO),在癌症研究、基因和细胞治疗、CAR T细胞开发和基因疫苗接种领域拥有强大的客户群。

PlasmidFactory根据客户的要求在现代实验室生产质粒和微环,具有从研究到GMP级别的高质量标准。我们公司的生物学家、化学家、工程师和技术助理;并将研发活动重点放在质粒和微环DNA的生产、开发、分析和储存等核心竞争力上。

我们目前正与工业和学术合作伙伴就以下研究主题进行密切合作:

无抗性基因序列的非病毒载体系统的开发(如微小圆环)

瞬态AAV生产,例如基于微型环形

用于共转染的载体的优化,例如用于生产病毒病毒(AAV、LV)或抗体或RNA生产

大规模高质量(HQ和GMP)生产用于临床应用的质粒和微环DNA的工艺开发

研究各种因素对质粒DNA长期稳定性的影响(如质粒大小、DNA浓度、储存介质)

冻融条件对质粒拓扑分布的影响

二聚体质粒的生产(例如报告基因载体)

毛细管凝胶电泳应用领域的扩展

质粒和微环DNA的QC,例如下一代测序慢病毒载体系统的优化

肝炎疫苗的载体开发

非病毒载体的临床和临床前研究

PlasmidFactory产品列表:

产品名称 产品介绍
Plasmid DNA

Different quality levels for research and (pre-) clinical studies allow optimal adaptation to your application. Our High Quality Grade plasmids

are particularly suitable for GMP-compliant

production of e.g. viral vectors and RNA.

Minicircle DNA Minicircle DNA contains almost exclusively the “Gene of Interest” and its regulating sequence motifs. Redundant bacterial backbone sequences are completely removed.
This results in a safe and highly efficient vector system meeting future regulatory requirements for gene therapy and vaccine products.

High Quality Grade Plasmd

&Minicircle DNA in large

scale

Starting material for GMP production of mRNA,viral vectors & CAR-T cells

PlasmidFactory质粒代理——上海金畔生物科技有限公司,提供提供Plasmid DNA、Minicircle DNA、Plasmid & Minicircle DNA in large scale等产品。PlasmidFactory华中代理,PlasmidFactory华南代理,PlasmidFactory华北代理,PlasmidFactory华东代理。

PlasmidFactory代理——上海金畔生物科技有限公司,作为一家专注于免疫学、细胞生物学、分子生物学等领域核心试剂产品的研发、生产与销售的高新企业。上海金畔生物科技有限公司是中关村高新技术企业,于2017年在北京成立。上海金畔依托于中科院的科研技术力量,以中科院资深科学家为核心,整合经验丰富的商业团队及管理团队组建而成。上海金畔在产品自主研发的同时,也与全球多家生命科学试剂供应商建立良好的合作关系,基于“客户第一”的核心理念,向全国10000+客户提供200000+优质产品。上海金畔将以品质树立品牌,以服务赢得口碑,致力于成长为重要的生物原料及生物化学试剂开发与成果转化的开kai tuo zhe,并成为行业ling xian的优质供应商。

740414.50-德国MN NucleoBond Xtra 质粒大抽试剂盒

产品型号740414.50

品       牌德国MN

产品简介

德国MN NucleoBond Xtra 质粒大抽试剂盒,从大肠杆菌中提取高拷贝/低拷贝质粒。新一代阴离子交换柱-短时间,高产量,转染用质粒。

详情介绍

德国MN NucleoBond Xtra 质粒大抽试剂盒

NucleoBond(R) Xtra Midi / Maxi    

特点:

节约60%的时间,增加100%的产量

  • 新一代阴离子交换超快,高产量的转染级别的质粒DNA

  • 优化设计的柱子:制备时间约为30 分钟(Midi prep)35 分钟(Maxi prep)

  • 包含柱过滤器:高过虑流速,清除裂解液中不溶物的同时可向柱子加样

  • 改进的硅材料:标准的产量250μg-1000μg

  • 专li的阴离子交换技术得到转染级别的质粒DNA

  • NucleoBond(R)Xtra Plus kits 包含NucleoBond(R) Finalizers;加速了DNA的沉淀

产品概览

NucleoBond(R) XtraMidi

NucleoBond(R) Xtra Maxi

技术

阴离子交换色谱法

产品形式

Midi gravity-flow columns

Maxi gravity-flow columns

裂解液澄清

柱过滤器

柱过滤器

样品材料

< 200 mL (高拷贝)

< 400 mL (低拷贝)

< 600 mL (高拷贝)

< 1 200 mL (低拷贝)

载体大小

< 300 kbp

< 300 kbp

产量

250 μg

1000 μg

A260/A280

1.80 1.95

1.80 1.95

异丙醇沉淀

Xtra Midi

Xtra Midi Plus

XtraMaxi

XtraMaxi Plus

Centrifugation

NucleoBond(R) Finalizer

Centrifugation

NucleoBond(R)Finalizer Large

制备时间

70min/4preps

30min/4preps

80min/4preps

35min/4preps

德国MN NucleoBond Xtra 质粒大抽试剂盒

应用:

从大肠杆菌中提取高拷贝/低拷贝质粒

订购信息

货号 名称 描述 规格
740588.50 NucleoSpin Plasmid (50) NucleoSpin 质粒小抽试剂盒 50次
740410.50 NucleoBond Xtra Midi(50) NucleoBond 超快速转染级质粒中提试剂盒 50次
740412.50 NucleoBond Xtra Midi Plus(50) NucleoBond 超快速转染级质粒中提试剂盒Plus 50次
740414.50 NucleoBond Xtra Maxi(50) NucleoBond 超快速转染级质粒大抽试剂盒 50次
740416.50 NucleoBond Xtra Maxi Plus (50) NucleoBond 超快速转染级质粒大抽试剂盒Plus 50次
740420.50 NucleoBond Xtra Midi EF(50) NucleoBond 超快速无内毒素质粒中提试剂盒 50次
740424.50 NucleoBond Xtra Maxi EF (50) NucleoBond 超快速无内毒素质粒大提试剂盒 50次
740426.50 NucleoBond Xtra Maxi EF Plus(50) NucleoBond 超快速无内毒素质粒大提试剂盒Plus 50次
740579 NucleoBond BAC 100 (10) NucleoBond BAC 大结构质粒提取试剂盒 10次

上海金畔生物科技有限公司是一家生物实验室产品供应商,20143月成立。一直以来公司坚持以产品齐全和杜绝假货两个宗旨要求自己。产品齐全是我们的特点,杜绝假货是基本的要求,主要经营生物实验仪器、耗材的高科技企业,Merck Millipore实验室过滤产品,包括过滤膜,Millex® 针头式过滤器,过滤装置,生物样本制备产品(离心超滤管,超滤杯,超滤多孔板),微生物检测滤膜,Milli-Q实验室纯水产品耗材配件等、PALL颇尔生命科学产品,包含实验室生物处理(多孔板,通气和气体过滤,除菌/澄清过滤,针头过滤器,真空过滤装置,囊式过滤器),蛋白质样品制备(离心浓缩管、Supor圆盘过滤膜,超滤膜,切向流超滤产品),蛋白层析产品,核酸、蛋白检测,预过滤产品(预过滤膜片、囊式预过滤器),滤器硬件(不锈钢圆形过滤器,PES过滤漏斗,真空/压力泵,在线过滤器),环境监测产品,微生物分析产品等、日本Advantec品牌产品、Cytiva Whatman生命科学产品,Munktell石英滤膜、滤筒等。公司成立以来,经过公司各个部门的努力奋斗,与国内多家企事业单位建立了良好的长期合作关系,在市场上树立了公司的良好信誉和形象。

我们拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务,能够及时解决和满足客户的各方面的需求,上海金畔生物科技有限公司热诚欢迎各界前来洽谈业务。

740410.100-德国MN NucleoBond Xtra 质粒中抽试剂盒

产品型号740410.100

品       牌德国MN

产品简介

德国MN NucleoBond Xtra 质粒中抽试剂盒,新一代离子交换技术,高产量制备转染级别的质粒DNA。可纯化高分子量质粒载体。柱过滤器可同步完成裂解液过滤和质粒吸附,250ug产量

详情介绍

德国MN NucleoBond Xtra 质粒中抽试剂盒

 产地:Germany
存储条件:常温
新一代离子交换技术,高产量制备转染级别的质粒DNA。可纯化高分子量质粒载体。柱过滤器可同步完成裂解液过滤和质粒吸附,250ug产量

德国MN NucleoBond Xtra 质粒中抽试剂盒技术参数

用于质粒DNA快速纯化的第二代阴离子交换剂

应用 转染级质粒DNA分离
类别 质粒DNA
CE 认证 仅供科研使用
技术 阴离子交换色谱法
品牌 NucleoBond
Format Midi prep
包装单位 10 Prep(s), 50 Prep(s), 100 Prep(s)
Handling 自流
裂解液澄清 Column filter
样品 细菌,大肠杆菌
样品量 < 200 mL (high copy), < 400 mL (low copy)
典型收率 < 300 kbp
典型收率 500 µg
理论结合容量 800 µg
A260/A280纯度 1.8−1.95
内毒素水平 1−10 EU/µg DNA
异丙醇沉淀 Centrifugation, NucleoBond Finalizer, NucleoSnap Finisher Midi, NucleoSpin Finisher Midi
时间 70 min/prep
典型应用 克隆,PCR,限制性分析,测序,细胞转染
存储条件 18−25 °C
保质期 39个月
危险品

7700-2810-Whatman 沃特曼 UNIFILTER 96孔DNA吸附过滤微孔板

产品型号7700-2810

品       牌沃特曼

产品简介

Whatman 沃特曼 UNIFILTER 96孔DNA吸附过滤微孔板可用于抽滤和离心操作,适合在每个高通量实验室应用。

详情介绍

Whatman质粒DNA吸收过滤板可单独使用或用于高通量微量制备系统。

质粒DNA在离液序列高的情况下吸附在滤器上,洗2次真空抽干。真空用水或TE缓冲液将zui终100 μl的质粒DNA提取抽入无吸附聚丙烯收集板内。DNA即可使用,不必进行乙醇沉淀。根据原始的培养液zui溶浓度为50 -100 ng/μl,OD260/280为1.9,96孔收率为每孔约6 μg。

质粒DNA吸附微孔板可用于抽滤和离心操作,适合在每个高通量实验室应用。

特点

  • DNA回收率平均每孔6 μg
  • 96孔*的收率
  • 洗脱的质粒DNA无基因组DNA污染
  • 高质量的DNA适于PCR,限制酶消化和测序
  • 节省时间:无需脱盐和乙醇沉淀
  • 无需试剂盒,减少消耗

7700-2810-Whatman 沃特曼 UNIFILTER 96孔DNA吸附过滤微孔板

荧光标记基因是怎么标记的?

  标记基因目的是为检测目的基因是否成功导入,由于一般都是有“鸟枪法”导入的目的基因,所以成功率并不是很高,目的基因的检测和筛选就显得很有必要。

  例如:大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体是否吸饱具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因,当人们用选择培养基(比如含有青霉素的培养基),来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了。

  扩展资料

  理想的报告基因通常具备如下基本要求:

  1、受体细胞中不存在相应内源等位基因的活性;

  2、它的产物是唯一的,且不会损害受体细胞;

  3、具有快速、廉价、灵敏、定量和可重复性的检测特性。目前常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、荧光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)等。

  荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键系统化学结构的化合物。当它们被紫外线或蓝紫光照射时,它们可以被刺激成刺激状态。当基态从刺激状态恢复时,它们会发出荧光。荧光标记技术是指利用荧光物质的共价组合或物理吸附在所需研究分子的某个基团上,利用其荧光特性提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射性污染、操作简单等优点,使得荧光标记在许多研究领域得到广泛应用。

  荧光标记物质也广泛应用于蛋白质功能研究、药物筛选等领域。人们使用荧光标记肽来检测目标蛋白的活性,并将其开发的高通量活性筛选方法应用于药物筛选和药物开发(如各种激酶、磷酸酶、肽酶等)。因此,多肽的荧光装饰也是多肽合成领域的重要组成部分。

  以下是一些常用的多肽装饰荧光材料:

荧光标记基因是怎么标记的?

  以下是一些荧光物质的激发光波长和发射光波长:

荧光标记基因是怎么标记的?

  1.FITC修饰

  异硫氰酸荧光素(FITC)活性高。一般来说,在固相合成过程中引入这种荧光基团比其他荧光素更容易,在反应过程中不需要添加活化试剂。

  FITC修饰的多肽通常有两种形式:

  (1)将FITC连接到整个肽链的末端,并在FITC之前连接到一分子ACP(6-氨基己酸),也称为烷基间隔器。在反应中,FITC与肽链上暴露的-NH2反应提供了六个碳直链空间,大大降低了反应的空间位阻,提高了反应效率,降低了反应难度。其次,FITC还与肽结构中的-SH、侧链-NH2反应,ACP的加入也降低了这种副反应的可能性。此外,当多肽在酸性环境条件下切割时,在N端连接到FITC的多肽需要通过环化形成荧光素,这通常伴随着最后一个氨基酸的切除,而烷基间隔器ACP的访问避免了这种情况。

  (2)整个肽中的Lys侧链连接到FITC,Lys侧链是终端为-NH2的四碳直链烷基,直接起到降低空间位阻的作用。这种装饰可以灵活地在整个肽的任何位置进行FITC装饰,而不仅限于终端。

  两种形式的FITC修饰多肽具有操作简单、成功率高、分离纯化方便等优点。

荧光标记基因是怎么标记的?

  2.AMC修饰

  7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)是一种广泛使用的荧光标记试剂,如酶的痕量测定、酶的识别、激光染料的制备等。此外,C端用香豆素修饰的泛素分子也是研究蛋白质泛素过程的重要探索。

  与其他荧光染料不同,AMC修饰多肽分子从C端进行:(1)AMC与肽链C端的第一个氨基酸反应;(2)固相合成整个肽链(从第二个氨基酸开始),保留整个肽链的侧链保护基和最后一个氨基保护基;(3)液相缩合AA-AMC和全保护肽链;(4)切除保护基,完成肽链的装饰。

荧光标记基因是怎么标记的?

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