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核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

核酸内切酶 VIII                              收藏

核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L 核酸内切酶 VIII 货 号 #M0299L

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
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广州库存
成都库存
苏州库存

#M0299L
5,000 units
3,359.00
有
无
无
无
无

#M0299S
1,000 units
829.00
无
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特性

 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
 碱洗脱
 碱解旋 

概述

大肠杆菌核酸内切酶 VIII 既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP）位点。AP-裂解酶活性则分别在 AP 位点的 3´ 和 5´ 端切割磷酸二酯键，产生 5´ 磷酸和 3´ 磷酸末端。能被核酸内切酶 VIII 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲 。尽管核酸内切酶 VIII 与核酸内切酶 III 的活性相似，但核酸内切酶 VIII 具有 β 和 δ 裂解酶活性，而核酸内切酶 III 只有 β 裂解酶活性。 

来源

克隆有 nei 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X Endonuclease VIII 反应缓冲液
[10 mM Tris-HCl，75 mM NaCl，1 mM EDTA（pH 8.0 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：75℃ 加热 10 分钟。 

质保声明

核酸内切酶 VIII 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 10 μl 缓冲液体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。
*AP 位点的创建方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）处理 10 pmol 含单一尿嘧啶碱基的 34 mer 寡核苷酸双链 2 分钟。 

彗星试验的推荐稀释倍数

1:104～1:105。详细步骤请联系我们。  

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

核酸外切酶 VIII，截短型 货 号 #M0545L NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 核酸酶

核酸外切酶 VIII，截短型                              收藏

核酸外切酶 VIII，截短型 货 号 #M0545L 核酸外切酶 VIII，截短型 货 号 #M0545L 核酸外切酶 VIII，截短型 货 号 #M0545L 核酸外切酶 VIII，截短型 货 号 #M0545L 核酸外切酶 VIII，截短型 货 号 #M0545L

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0545L
5,000 units
3,509.00
无
无
无
无
无

#M0545S
1,000 units 
909.00
无
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特性

 降解线性双链 DNA，保留环状双链DNA

概述：

 核酸外切酶 VIII,截短型是大肠杆菌核酸外切酶 VIII 活性结构域的基因工程酶。其从 5´ →3´ 方向切除线性双链 DNA 的 5´ 末端核苷酸。该酶不降解超螺旋双链 DNA 和环状单链 DNA。

来源

 来源于 E. coli，克隆自含核酸外切酶 VIII 基因活性区域的基因工程质粒。

反应条件：

 1X NEBuffer 4 反应缓冲液。37℃ 温育。热失活：70℃ 加热 15 分钟。

质保声明：

核酸外切酶 VIII，截短型经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。

单位定义：

1 单位指在 50 μl 含超声处理的 0.15mM [3H]-标记双链 DNA 的1X NEBuffer 4 反应缓冲液体系中，37℃ 条件下，30 分钟内能催化双链 DNA产生 1 nmol 酸溶性脱氧核苷酸所需的酶量。单位活性检测条件请联系我们。

浓度：

 10,000 units/ml

参考文献：

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。
 

抗凝血因子VIII单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备方法

发表于由

通过用牛血清白蛋白BSA与人凝血因子VIII偶联后的偶联物作为抗原免疫Balb/c小鼠，取其脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，用HAT培养基进行选择性培养，利用有限稀释法通过多次克隆化，经过筛选获得稳定分泌抗人凝血因子VIII单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

抗凝血因子VIII单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备方法

制备步骤：

1)制备免疫抗原：通过同型双功能蛋白交联剂将人凝血因子VIII与 牛血清白蛋白偶联，得到人凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶联物；

2)免疫小鼠：采用小剂量长周期免疫方案，利用步骤1)中得到的人 凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶联物作用免疫抗原，对Balb/c小鼠进行免 疫；

3)细胞融合：将SP2/0小鼠骨髓瘤细胞与步骤2)获得的免疫Balb/c 小鼠的脾脏细胞融合，在含有HAT的RPMI-1640培养基中进行选择性培 养；

4)杂交瘤细胞的选择性培养：在步骤3)中融合后的细胞在HAT培养基 中选择性培养后，选择小鼠脾脏细胞与小鼠杂交瘤细胞SP2/0的融合细胞；

5)单克隆化：将步骤4)中获得的经检测为阳性的杂交瘤细胞经有限稀释法进行多次单克隆获得稳定分泌抗人凝血因子VIII单克隆抗体的杂 交瘤细胞株。