PEI线性转染试剂特点及常见问题

发表于2024年3月19日由上海金畔生物科技有限公司

PEI线性转染试剂特点及常见问题

一、PEI线性转染试剂

PEI又称为线性化聚乙烯亚胺，是人工合成的含有高密度正电荷的有机大分子阳离子聚合物。PEI与DNA通过正负电荷的相互吸引形成复合物，是较为有效的聚阳离子型基因载体，转染效率高。PEI转染试剂可以方便地进行化学修饰，并且不会像脂质体一样破坏细胞结构，所以相对毒性较低。

二、PEI Max转染试剂(24765-1)特点

·转染效率高，细胞毒性低；

·蛋白表达量高；

·节约成本：PEI至少能够降低40%的转染试剂总成本；

·适用于HEK293等真核细胞的转染；

·适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染；

·适用于有血清和无血清的转染条件；

·无机试剂，无动物源成分；

·产品稳定，质控严格；

·工艺流程适用范围广，容易优化，适合小规模培养板、培养瓶到大规模的生物反应器。

三、PEI转染试剂性能

图1 转染PEI后的抗体表达

500mL HEK293细胞(A、C、E)和CHO细胞(B、D、F)细胞培养物转染LPEI、PEI Max和PEI pro^TM。采用蛋白-A HPLC法检测单克隆抗体曲妥珠单抗(A、B)、Palivizumab单抗(C和D)和B72-3(E和F)的滴度，与LPEI(PEI 25K)相比，当使用PEI Max和PEI pro^TM时，三种抗体的表达量都较高，但使用PEI Max试剂转染能使所有抗体都有最高表达。由此可见，PEI Max转染试剂(MW 40000)具有更高的转染效率。

四、转染中的常见问题

1.转染效率低

原因：(1)细胞活力：使用活力好传代小于15代的细胞。

(2)细胞接种密度高/低：适当降低/增加接种密度。

(3)PEI/DNA比率不合适：进行不同基因转染时应对PEI和DNA的比例进行优化，以达到最适比例。

(4)质粒片段较大：可根据实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。

(5)混合方式不当：质粒DNA和PEI溶液混合时避免涡旋。同时要注意PEI加入 DNA溶液中的顺序。

2.细胞毒性高

原因：(1)转染液孵育时间过长：过长时间 PEI/DNA 复合体会导致细胞毒性。

(2)细胞接种密度低：适当增加接种密度。

(3)PEI/DNA比例高：优化合适的PEI和DNA的比例。

上海金畔生物科技有限公司提供多种PEI线性转染试剂，具体信息请咨询上海金畔客服。

PEI线性转染试剂的使用可有什么要领

发表于2024年3月19日由上海金畔生物科技有限公司

PEI线性转染试剂的使用可有什么要领

　　PEI线性转染试剂是由一种阳离子聚合物转染试剂，分子量40000，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广泛适。该试剂可在含血清与抗生素的*培养基中发挥作用，即使在有血清存在的情况下，它仍然能高效的将核酸导入细胞。实验操作简单，对大多数培养细胞都有较高的转染效率(用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等)，并且细胞毒性较低。

　　PEI线性转染试剂的注意事项：

　　1、质粒质量：请务必使用高纯度无内毒素转染级质粒。通过260nm光吸收测定DNA浓度，260nm/280nm比值确定DNA纯度。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

　　2、细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。

　　3、细胞培养液要求：PEI线性转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前不需要换培养基。但是制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。确保细胞培养液没有被细菌、真菌或支原体污染。转染时培养液中不添加抗生素。

　　4、DNA浓度和PEI转染试剂量的优化：DNA浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，初次使用应优化DNA浓度和转染试剂量以得到大的转染效率。使用者可尝试每1μgDNA使用1～4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。DNA和转染试剂的比例，通常推荐是1:2~1:5。

PEI线性转染试剂的具体操作流程是怎样的

发表于2024年3月18日由上海金畔生物科技有限公司

PEI线性转染试剂的具体操作流程是怎样的

　　PEI线性转染试剂的操作流程：

　　1、细胞铺板

　　提前一天将细胞种植在六孔板中，以转染时细胞密度在70%~80%为宜。

　　2、转染过程

　　（1）在转染前2h，移除细胞上原有的培养基，换为新鲜的*培养基。

　　（2）将2ug质粒DNA用50uL无血清稀释液稀释，充分混匀制成DNA稀释液。

　　注意：无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O

　　（3）向DNA稀释液中直接加入4uL转染试剂，室温静置10~15min。转染复合物配制完成。

　　（4）将转染复合物加入细胞培养基中，轻柔混匀。

　　（5）继续培养24~48h，收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。

　　（6）使用本产品转染后一般在24h开始进入表达高峰期，36~48h达到表达高峰，相对于脂

　　质体转染试刘，达到峰值的时间延后约6~12h。

　　PEI线性转染试剂的注意事项：

　　1）本产品对细胞非常温和，一般情况下转染后无需进行换液操作。

　　2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

环糊精(准)聚轮烷的七种形态介绍(线型/星型/嵌段共聚物/pH敏感)

发表于2023年10月23日由上海金畔生物科技有限公司

环糊精聚轮烷是超分子化学的重要成员之一，由于它的尺寸可控性以及结构独特性等激起了研究人员的兴趣.轮烷[1-3]像一串“珍珠链”(图1)，是一类由环状主体分子(珍珠)与穿过其内腔的长链线性客体分子(轴线)所组成的超分子体系，在长链线性分子的两端连接有防止大环主体分子滑脱的封端剂封端(塞子).准轮烷是一类与轮烷具有相似结构的超分子体系，二者的不同点在于轮烷的长链线性分子两端都存在封端剂封端，而准轮烷长链线性分子两端不存在或只有一端存在封端剂封端.准轮烷超分子体系很不稳定，若线性分子与环状分子之间的作用遭到破坏，环状分子可以在线性分子上自由滑动或脱落下来.但是，改变外部环境、温度、pH值、分子间的作用力等条件，其又可以恢复原态.准轮烷的这种可逆特性为分子机器、分子开关、*物载体等设计提供了潜在的应用价值.根据准聚轮烷的不同结构可将其分为七种类型[4-8]：线型(准)聚轮烷、嵌段共聚物(准)聚轮烷、金属软连接(准)聚轮烷、(准)聚轮烷聚集体、pH敏感型(准)聚轮烷、侧链型准聚轮烷和星型准聚轮烷.环糊精轮烷与准轮烷在智能材料、组织工程支架等方面备受研究.