PEI线性转染试剂的使用可有什么要领

PEI线性转染试剂的使用可有什么要领  

  PEI线性转染试剂是由一种阳离子聚合物转染试剂,分子量40000,它能与核酸形成复合物,并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广泛适。该试剂可在含血清与抗生素的*培养基中发挥作用,即使在有血清存在的情况下,它仍然能高效的将核酸导入细胞。实验操作简单,对大多数培养细胞都有较高的转染效率(用于常见细胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等),并且细胞毒性较低。
  PEI线性转染试剂的注意事项:
  1、质粒质量:请务必使用高纯度无内毒素转染级质粒。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
  2、细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。
  3、细胞培养液要求:PEI线性转染试剂可用于有血清培养基的转染,并且转染前不需要换培养基。但是制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。确保细胞培养液没有被细菌、真菌或支原体污染。转染时培养液中不添加抗生素。
  4、DNA浓度和PEI转染试剂量的优化:DNA浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响,初次使用应优化DNA浓度和转染试剂量以得到大的转染效率。使用者可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。DNA和转染试剂的比例,通常推荐是1:2~1:5。