原代细胞取材的注意事项有哪些?

原代细胞取材的注意事项有哪些?

取材作为原代细胞培养过程中至关重要的一步,那么原代细胞取材的注意事项有哪些呢?让我们一起来看看吧!

一、皮肤和粘膜

主要取皮片,面积一般2~4平方厘米。

二、内脏和实体瘤

1.无菌环境;

2.熟悉所需组织的类型和部位;

3.要避开破溃、坏死液化部分,以防污染,尽量去除混杂的结缔组织。

三、血液细胞

一般多抽取静脉外周血,或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝。

四、骨髓、羊水、胸/腹水细胞

严格无菌,注意抗凝,还要尽快分离培养,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。

五、动物组织取材——鼠胚组织

1.用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物;

2.将其浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5分钟后取出动物;

3.在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤;

4.用无菌操作法解剖取胚。

六、动物组织取材——幼鼠胚肾(或肺)

幼鼠采用上述方法处死消毒后→腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧→采用无菌法打开胸腔取肺,或从背部打开腹腔取肾。

七、鸡(鸭)鸟类胚胎组织

1.取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋,用照蛋灯在暗处灯检,若有丰富血管、胚体有运动的胚蛋,说明胚体发育良好,并用有色笔划出气室和胚体位置;

2.将胚蛋置于蛋架上,先用温水清洗蛋壳,再用75%酒精棉球擦干;

经碘酒、75%酒精消毒后,在无菌条件下采用无菌法用剪刀或镊子打开气室,沿气室边缘去除蛋壳;

3.用眼科镊撕去壳膜,暴露出鸡胚;

4.用弯头镊轻挑起胚头,取出胚胎,放入无菌平皿中,解剖取材。

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原代细胞的取材要求

原代细胞的取材要求

  原代细胞取材的基本要求:
 
  (1)取材要注意新鲜和保鲜 新鲜组织易于培养成功,取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞,尽快入箱培养,若不能即时培养,应将组织浸泡于培养液内,于4℃存放。若组织块较大,应在清除表面坏死组织、脂肪和结缔组织后,切碎于培养液内4℃存放,但时间不能超过24h。对于已切碎的组织或血液、淋巴组织应加入含10%二甲基亚砜的培养基,按细胞冻存方式于液氮中冷冻保存。
 
  (2)取材应严格无菌 所取标本材料应在无菌条件下进行,为了确保无菌,对所取材料若疑有污染的可能,应将所取组织在含高浓度抗菌素(400单位/mL)甚加入适量的两性霉素B或10%达克宁液的培养液内于4℃下存放2小时以上,再用PBS洗2~3次,以确保所取材料无菌。要用无菌包装的器皿或事先消毒好的带少许培养液(内含400单位/mL抗菌素)的小瓶等便于携带的物品来取材,所取材料应避免接触有毒有害的化学物质,如碘、汞等。
 
  (3)取材和原代细胞制作时,要用锋利的器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织,尽可能减少对细胞的机械损伤。
 
  (4)要仔细去除所取材料上的血液、脂肪、坏死组织及结缔组织,切碎组织时应避免组织干燥,可在含少量培养液的器皿中进行。
 
  (5)取材应注意组织类型、分化程度、年龄等,一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低的较分化高的组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养。取材时应尽量选用易培养的组织进行培养。
 
  (6)原代细胞取材时要同时留好组织学标本和电镜标本。对组织的来源、部位、包括供体的一般情况要做详细的记录,以备以后查询。