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原代宫颈癌条件重编程培养基
详情介绍
产品名称：原代宫颈癌条件重编程培养基（Human Cervical Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）
产品说明：原代宫颈癌条件重编程培养基（Human Cervical Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）是一种为促进宫颈鳞癌原代细胞体外生长而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基产品基于碳酸氢盐的缓冲体系，在5%CO。/95%空气的培养箱中平衡时，pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个理想平衡的营养环境，选择性地促进体外人宫颈鳞癌原代细胞的生长。
产品优势：
(1) 培养成功率高
(2) 体外持续扩增
(3) 保持肿瘤原始病理特征
(4) 药敏结果宇临床数据接近
使用说明
◉使用前准备
(1) 15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min；提前30min从4 ℃冰箱取出原代细胞培养基平衡至室温。
(2)γ 射线照射过的NIH-3T3细胞（40 Gy辐照）。
◉宫颈癌原代细胞培养
（1）初次分离的宫颈癌小样本细胞悬液一般无需计数，直接种入12孔板中。
（2）宫颈癌术中样本过70微米筛网后计数，按照表1中细胞数接种在合适的培养器皿中，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞（添加滋养细胞数量如表1所示）。
（3）原代细胞初次接种后2-3天勿动（利于细胞贴壁），培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可换半液，镜下观察细胞未长满但3T3细胞已不足时，适量补充γ射线辐照后的3T3细胞（一般补加初始数目的一半）。
注：针对实体瘤样本，细胞粒径大于10微米进行计数;倍增时间>48小时则定义为增殖较慢的细胞；对于增殖较快细胞，可以综合倍增时间、接种器皿的规格以及培养周期来估算接种的细胞数量;表格供参考，具体实验具体对待。
◉宫颈癌原代细胞传代
（1）镜下观察细胞形成克隆，且汇合度达到80~90%时即可传代。
（2）培养箱中取出细胞，弃旧日培养液，0.25%胰酶洗涤30秒后吸尽，再加入适量0.05%胰酶，37℃孵育，5min后拿出轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况。
（3）细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用原代细胞终止培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，1500 rpm, 3 min。
（4）弃上清，以1-2mL条件培养基重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板，加入y射线辐照后的NIH-3T3细胞（不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量如表1所示），补加宫颈癌培养基至所需体积，轻轻摇晃混匀，表面消毒后置培养箱，37℃、5%CO2条件培养。其他步骤同上。
注意事项：
1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.本产品中含有胎牛血清和原代细胞专用抗生素，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可直接使用。
3.样本需为肿瘤组织，且肿瘤细胞比例越高（>50%），培养成功率越高。
4.为保持本产品的理想使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
5.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
6.原代细胞初次接种时会贴壁较慢和贴壁不牢，若无必要，尽量减少取出观察的次数，建议2~3天一次。
7.传代消化时切记不要消化过度，不宜超过5min，对细胞造成损伤，影响细胞状态。
8.接种细胞时注意细胞密度，不可过稀或过密。
9.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
10.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。
