免疫荧光实验的流程
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Alzet渗透泵在动物实验中的操作流程
Alzet渗透泵在动物实验中的操作流程
渗透泵是一种常用于动物实验的工具,用于持续、精确地给予动物药物或其他溶液。Alzet渗透泵已用于数千项关于控制输送各种实验剂(包括肽、生长因子、细胞因子、化疗药物、成瘾药物、激素、类固醇和抗体)影响的研究。由于Alzet渗透泵的du特运行机制,任何分子构象的化合物都可以以可控的速率以可预测的速度输送,而不受其物理和化学性质的影响。那么你知道Alzet渗透泵在动物实验中的操作流程吗?让我们一起来看看吧!
一、准备工作:
1. 检查Alzet泵的有效期,确保其在使用期限内。
2. 准备所需的药物或溶液,并按照所需的浓度进行配制。
二、安装泵:
1. 将Alzet泵从包装中取出,并检查其完整性。
2. 在一个无菌环境下,用无菌手套将泵浸泡在无菌生理盐水中,以激活泵。
3. 在泵的顶部找到标有“INLET”的端口,用一个无菌注射器将药物或溶液缓慢注入泵内,直到液体开始从另一端的“OUTLET”端口流出。
4. 将注射器从“INLET”端口拔出,并立即用封闭塞或无菌胶布封闭。
三、植入泵:
1. 选择合适的植入位置,常见的包括皮下、腹腔或体腔等。
2. 使用无菌手套和工具,在实验动物身上创建一个合适大小的切口或穿刺点。
3. 小心地将泵植入切口或穿刺点,确保其稳定固定在动物体内。
4. 关闭切口或穿刺点,使用缝合线或无菌胶布进行固定。
四、监测和记录:
1. 在植入泵后,确保动物的恢复环境和饮食正常,并监测其行为和健康状况。
2. 根据实验设计,定期记录动物的重量、摄食量、药物效应等数据。
五、泵的取出:
1. 在实验结束或泵内药物wan全释放后,需要取出泵。
2. 使用无菌手套和工具,打开切口或穿刺点,小心地取出泵。
3. 关闭切口或穿刺点,并进行适当的处理或对伤口进行处理。
以上只是一般的操作流程,并且在使用Alzet渗透泵时,应遵循实验室的操作规范和相关伦理指南。具体操作步骤和注意事项可能会因实验动物的种类、药物的特性等而有所不同。因此,在进行动物实验前,建议咨询实验室的专业人员或参考相关文献和说明书,以确保操作的准确性和安全性。
更多有关Alzet渗透泵在动物实验中的操作流程,请联系Alzet渗透泵代理——上海金畔生物科技有限公司。
你知道DNA提取纯化流程有哪些吗?让我们一起来看看吧!
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细胞表面染色实验操作流程是什么?
细胞表面染色实验操作流程是什么?
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一、细胞计数
将培养好的细胞收集于15mL离心管并计数;500g离心4min,去上清。
二、制备单细胞悬液
将收集的细胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重悬,400g离心3min,去上清,重复2次;用0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞至浓度1×106个细胞/mL,分配到96孔板中,每孔100μl细胞悬液。
三、阻断Fc受体
室温孵育10-20min。
四、一抗孵育
每孔加入稀释后的一抗溶液100μl,2-8℃反应30min。
五、洗涤
400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。
六、二抗孵育
对于非荧光染料直标抗体,加入100μl荧光二抗重悬,避光2-8℃反应30min。对于直标抗体直接跳到步骤八。
七、洗涤
400g离心5min,去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬,离心去上清,重复两遍。
八、重悬细胞
用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重悬细胞,4℃保存,上机分析。
更多有关细胞表面染色实验的操作流程,请联系上海金畔生物科技有限公司:
【干货】一文了解vero细胞培养全流程
【干货】一文了解vero细胞培养全流程
Vero细胞系是连续非整倍体细胞,连续细胞系可以经过多次分裂而不衰老,非整倍体是指细胞中的染色体数目与通常的不同。与其它普通哺乳动物细胞不同,Vero细胞还有干扰素分泌缺陷的特点,当被病毒感染时,它不能分泌干扰素,但它仍然具有α/β-干扰素的受体,所以对于其它来源的干扰素仍有正常的反应。
一、基本信息
细胞名称:Vero非洲绿猴肾细胞
细胞别称:VERO; Verda reno
细胞形态:上皮细胞样
生长特性:贴壁生长
组织来源:正常肾
培养基:MEM+10%FBS+1%PS
生长条件:
①气相:95%空气+5%二氧化碳;
②温度:37℃
传代方法:1:2至1:3,每周2-3次。
二、培养指南
1. Vero细胞复苏步骤
(1)将1mL Vero细胞悬液冻存管于37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基进行混合均匀;
(2)在1000rpm条件下离心4min,弃上清液,再加入1-2mL培养基后轻轻吹打混匀;
(3)将Vero细胞悬液加入到含有适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入到6cm皿中,加入约4mL的培养基,培养过夜);
(4)第二天换液并观察Vero细胞密度。
2. Vero细胞传代步骤
Vero细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
(1)1mL Vero猴肾细胞悬液冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀;
(2)在1000rpm条件下离心4min,弃上清液,再加入1-2mL培养基后吹打混匀;
(3)将Vero猴肾细胞胞悬液加入到含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入到6cm皿中,加入约4mL培养基,培养过夜);
(4)第二天换液并观察Vero细胞密度。
3. Vero细胞冻存步骤
Vero细胞生长状态良好,可进行细胞冻存。以T25瓶为例:
(1)收集Vero细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,于1000rpm条件下离心4min,弃上清液,用PBS清洗一遍,弃掉PBS后进行细胞计数。
(2)根据Vero细胞数量对应加入无血清细胞冻存液,使细胞密度在5×106~1×107/mL之间,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管上做好标识。
(3)将冻存管放入-80℃冰箱中,24h后转入液氮灌储存。
三、注意事项
1. 培养基不能回收使用
灌液培养基不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的wan全培养基来培养细胞。
2. 细胞到货处理说明
(1)收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。
(2)观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。
(3)收到Vero细胞后第一次传代建议1:2传代,1:2传代是指1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿,而不是1个T25瓶传2个10cm皿。
四、常见问题
1. vero细胞培养出现小黑点?
处理方法:在细胞消化离心弃上清后,使用PBS重悬洗涤,在750rpm条件下低速离心4min,重新铺下,然后镜下观察是否干净。
2. vero细胞生长过慢?
(1)更换不同培养基或血清导致
解决方法:分析新培养基与原培养基的成分,比较新血清与原血清支持细胞生长实验,让细胞逐渐适应新培养基。
(2)有少量细菌或真菌污染
解决方法:用含抗生素培养液培养,如发现污染,尽量丢弃培养物。
(3)试剂保存不当导致
解决方法:血清需要保存在-10到-20℃;
培养基需在2-8℃避光保存;
含血清wan全培养液在2-8℃保存。
(4)接种细胞起始浓度太低
解决方法:增加接种细胞起始浓度。
(5)细胞已老化
解决方法:引入新的保种细胞,重新培养。
(6)支原体污染
解决方法:吸取部分培养基,离心得上清,检测支原体;
清洁支架和培养箱;
可在培养皿里加入支原体去除剂清除;
如发现支原体污染,建议尽量丢弃。
3. vero细胞培养过程中不贴壁?
(1)胰酶消化过度导致
解决方法:尝试缩短胰酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
(2)支原体污染
解决方法:吸取培养2-3的培养基,检测支原体;
清洁支架和培养箱;
如发现支原体污染,丢弃培养物。
(3)培养基pH值过碱(NaHCO3分解)
解决方法:使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2。
(4)细胞老化
解决方法:购买新的代数较低的细胞。
(5)接种细胞起始浓度太低或太高
解决方法:调节最佳接种细胞浓度。
4. vero细胞用什么培养基?
vero细胞培养基:MEM+10%FBS+1%P/S
5. vero细胞DMSO冻存比例?
冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配或无血清细胞冻存液。
更多有关vero细胞培养知识,请咨询上海金畔客服。