Elabscience Annexin V-FITC / PI细胞凋亡检测试剂盒的操作方法有哪些？

Elabscience Annexin V-FITC / PI细胞凋亡检测试剂盒是用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡试剂盒。那么你知道Annexin V-FITC / PI细胞凋亡检测试剂盒的操作方法有哪些吗？让我们一起来看看吧！

一步法

1．细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g 离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。

2．取 1~5 × 10⁵ 重悬的细胞，300 ×g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer重悬细胞。

3．细胞悬液中加入5μL的Annexin V-FITC Reagent和5μL的 PI Reagent (50μg/mL)。

4．轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15~20 min。

5．立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。

注：流式细胞仪检测时Annexin V-FITC可用FITC通道，PI 优先选择PerCP/Cy5.5 通道，其次是ECD通道。

两步法

1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。

2. 取1~5 × 10⁵重悬的细胞，300 ×g离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入100 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。

3. 细胞悬液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和2.5 μL的PI Reagent (50μg/mL)。（由于两步法 分辨率更高，染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果；用户亦可根据自己的模型进行滴定后 加入适量的染色液，用更少的量获得高质量的结果。）

4. 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。

5. 加入 400 μL 稀释的1 × Annexin V Binding Buffer，混匀样本。

6. 立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。 注：流式细胞仪检测时Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，PI优先选择 PerCP/Cy5.5 通道，其次是 ECD 通道。

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