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原代乳腺上皮细胞*培养基

产品名称：原代乳腺上皮细胞*培养基（Human Mammary Epithelial Cell Medium）
产品说明：原代乳腺上皮细胞*培养基（Human Mammary Epithelial Cell Medium）是一种促进人乳腺原代上皮细胞体外生长的培养基。该产品是一种无菌的液体混合系统，含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。培养基基于碳酸氢盐的缓冲体系，在5%CO2/95%空气的培养箱中平衡时，pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个合适的营养环境，选择性地促进体外人乳腺原代上皮细胞的生长和扩增。

产品优势：
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤原始病理特征

(4) 药敏结果与临床数据接近

使用说明：
◉使用前准备
（1）15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30min。
（2）提前30min从4℃冰箱取出*培养基平衡至室温，提前从-20℃冰箱取出所需体积的细胞外基质胶冰上融化。
◉乳腺原代细胞培养
（1）采用预冷的DMEM/F12培养基将细胞外基质胶（Corning#356231）按1∶ 50比例稀释，至少提前30min 将稀释后的基质胶预铺在培养瓶/板底部表面，并使其*覆盖底部表面，30~60 min后吸干备用。
（2）将分离并计数后的细胞悬液参考表1中细胞数量接种于培养瓶/板，补加*培养基至所需体积，轻轻摇晃混匀，表面消毒后放置于培养箱，37℃、5%CO2条件下进行培养。
（3）原代细胞初次接种后2-3天内勿动（利于细胞贴壁）。

◉原代乳腺上皮细胞传代
（1）镜下观察细胞形成克隆，且汇合度达80~90%时即可传代。
（2）培养箱中取出细胞，弃去旧培养液，加入适量TrypLE*Express酶（Gibco#12605010）37℃孵育，10~20min后取出，轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况。
（3）细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用含10%胎牛血清的DMEM培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，室温，300g，离心5min。
（4）弃上清，以1-2mL*培养基重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于预铺有基质胶的培养瓶/板底部，预铺方法同上。
（5） 补加*培养基至所需体积，轻轻摇晃混匀，表面消毒后置于培养箱，37℃、5%CO2条件下继续培养。
注意事项：