知道悬浮细胞的瞬时转染操作有什么吗？让我们一起来看看吧！

　　一、细胞转染前的准备

　　1、细胞：

　　贴壁生长细胞：一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞），最好在转染前2-4 h换一次新鲜培养液。

　　悬浮细胞：转染前12-16 h进行悬浮细胞传代，传代后适宜的细胞密度为20-40×104/mL。台盼蓝染色进行活细胞计数保持活细胞比在95%以上。

　　提前将293F细胞的密度调整至合适的密度后（2×106-4×106细胞/ml）于37℃摇床培养2-4 h后进行转染。注意，参与转染的细胞必须是培养三代或以上的稳定细胞株。

　　2、DNA：

　　使用去内毒素质粒大提试剂盒提取质粒，于生物安全柜/超净台用0.22μm滤头过滤除菌。

　　3、稀释液：

　　于生物安全柜/超净台用0.22μm滤头过滤除菌。

　　4、转染试剂：

　　转染试剂如PEI溶液长期储存于-20℃，不可反复冻融，溶液在4℃放置不超过一周。

　　二、操作步骤（悬浮细胞）

　　1、取一支已灭菌的Ep管，加入一定量的DNA，以相应体积的300 mM NaCl稀释，用枪头混匀后静置5 min；

　　另取一支已灭菌的Ep管，加入相应体积的300 mM NaCl稀释对应体积的PEI溶液用枪头混匀后静置5 min（稀释液与DNA、PEI的总体积应为转染体积的5%）。

　　将质粒和PEI溶液混合，枪头混匀后静置一段时间，使DNA与PEI形成稳定的聚合物。

　　2、从摇床中取出293F细胞。用1 mL移液枪滴缓慢滴加转染混合液，边加边摇晃摇瓶使转染更加充分。

　　3、转染后将悬浮细胞置于摇床中培养，条件为37℃、8%CO2、110 rpm。每隔24 h进行细胞计数并用台盼蓝染色液观察细胞的存活率。

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