三一造血CIK 细胞高效扩增试剂盒（CT-009）产品介绍

产品简介：

细胞因子诱导杀伤性细胞（CIK 细胞）是一个异质细胞群，包含 CD3+CD56+NK 样 T 细胞和CD3+CD8+细胞毒性杀伤作用 T 细胞，具有杀伤肿瘤具有 MHC 限制性和非 MHC 限制性的特点， CIK 细胞对各种肿瘤尤其是对低表达 MHC Ⅰ Ⅱ分子更有效。 本试剂盒可以从单个核细胞（MNC）在体外高效扩增成 CIK 细胞，为免疫学研究提供了一个有力工具。

产品特点：

· 成份明确，无异源成份

· 无菌，无支原体，低内毒素

· 同时适用于胶血与外周血

· 14天培养后，细胞活率在90%以上wan全无血清培养，使用更安全

· 杀伤活力强，主要成分为NK样T细胞及细胞毒性T细胞

操作方法：

一、血浆的提取与保存

1.将取到的 50-60mL 外周血置于 50mL 离心管中，室温下 650g，离心 15min；

2.取上层黄色血浆部分于新的 50mL 离心管中（下层为血液细胞成分，用于后续单个核细胞的提取）；

3.将血浆置于 56°C 水浴锅中灭活 30min；

4.血浆灭活完毕后，可见血浆呈现浑浊状，900g，离心 10min；

5.取上清，于 4°C 保存待用。

二、单个核细胞的提取

1.取血浆提取步骤的下层红色细胞沉淀，加入生理盐水或 PBS 至原体积；

2.取 2 支 50mL 离心管，分别加入 15mL 淋巴细胞分离液，并将 1 步骤中的稀释血液分别缓缓铺加到淋巴细胞分离液的上层；

3.室温下，800g 离心 20min（升速 1-5，无闸减速）；

4.离心后，离心管中样品由上到下分为 4 层：血浆层-白膜层-人淋巴细胞分离液层-红细胞与粒细胞的沉淀。分别小心吸取白膜层及其以下约一半的液体于新的离心管中，并加入生理盐水或PBS 至 40mL 体积，混匀，300g 离心 10min；

5.弃上清，沉淀再次用 40mL 的生理盐水或 PBS 重悬，300g 离心 10min；

6.弃上清，沉淀用少许 CIK 细胞无血清培养基重悬，合并，取部分细胞悬液计数，备用。

三、单个核细胞接种与补液

1.第0天，配制50mL CIK 细胞wan全培养基：CIK 细胞无血清培养基 45mL，10%已热灭活的自体血浆（5mL），CIK-I 100μL，CIK-II 100μL 以及终浓度为 1000IU/mL 的 IL-2。将制备好的单个核细胞（MNC）按 1.5M cells/mL 的细胞密度接种于 50mL 已配制好的 CIK 细胞wan全培养基中，混合均匀后转移至 T75 瓶中，而后将 T75 瓶转移至 5%二氧化碳培养箱 37°C 培养；

2.第 3 天（3×24h），补加 CIK 细胞无血清培养基 95mL，5%已热灭活的自体血浆（5mL）以及 IL-2（IL-2 终浓度为 1000IU/mL），转入细胞培养袋，此时培养袋含 150mL 培养基；

3.第 5 天，补加 CIK 细胞无血清培养基 150mL，1%已热灭活的自体血浆 1.5mL 以及 IL-2（IL-2终浓度为 1000IU/mL），此时袋子含 300mL 培养液；

4.第 7 天，补加 CIK 细胞无血清培养基 300mL，剩余的所有自体热灭活血浆以及 IL-2（IL-2 终浓度为 1000IU/mL），然后分成两袋，此时每个袋子约含 300mL 培养液；

5.第 9 天，分别往每个培养袋补加 CIK 细胞无血清培养基 300mL 以及 IL-2（IL-2 终浓度为1000IU/mL），此时每个袋子约含 600mL 培养液；

6.第 11 天，分别往每个培养袋补加剩余 CIK 细胞无血清培养基以及 IL-2（IL-2 终浓度为1000IU/mL），此时每个袋子约含 1000mL 培养液；

7.第 13-14 天，收获 CIK 细胞。

产品选购：