细胞转染的几种方法

细胞转染的几种方法

  细胞转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
 
  细胞转染的几种方法:
 
  1.脂质体转染法
 
  阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过融合或细胞内吞进入细胞。适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前实验室方便的转染方法之一,其转染率较高,优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性,所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
 
  2.电穿孔转染法
 
  电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下,高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂,可以大大的降低细胞的死亡率,同时提高电穿孔转染效率。
 
  3.病毒感染
 
  对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染,此法可以快速感染,检测成功率高。