光学成像(Optical Imaging),由于其具有非侵入性、实时、快速反馈和高灵敏度的优点,在体内生物信息可视化中起着至关重要的作用。然而,由于复杂生物器官和组织中的内源性荧光团(黑色素,弹性蛋白,胶原蛋白,角蛋白,卟啉和黄素等)在外部辐射激发下会产生自发荧光,这使得活体荧光成像时的背景信号升高,从而限制成像时的信噪比(Signal-to-Noise Ratio, SNR)。
生物发光成像已被广泛用于跟踪细胞,监测基因表达,检测生物活性小分子,肿瘤成像等领域。然而,常规的基于荧光素酶(Luciferase)的生物发光探针发射光往往位于可见光范围(VIS,400 nm-700nm),这使得在将其应用于生物成像时会受到强大的组织吸收和散射干扰,因此难以获得清晰的成像结果。
七甲川菁染料FD-1029的发射波长位于近红外第二窗口(1029 nm),且分子间具有较大的空间位阻,在较高浓度下不易发生聚集,能够拥有较大的摩尔消光系数。该探针具有良好的生物相容性,成功应用于小鼠的血管和淋巴管的高质量成像。与相同条件下的近红外第二窗口荧光成像以及常规生物发光成像相比较,其信噪比提高约5倍,空间分辨率提高约1.5倍。

同时,由于这种能量传递策略的可调性,这类探针也能应用于多通道的活体标记成像。利用该探针对三磷酸腺苷(ATP)的特异性响应,结合肿瘤组织由于旺盛的新陈代谢往往具有较高的ATP的特点,成功实现了对肿瘤的高信噪比成像。在淋巴结转移瘤的追踪实验中,对同一小鼠两侧淋巴节转移瘤分别进行近红外二区荧光成像和生物发光成像对比。结果表明,由于无需外加激发光源,近红外二区生物发光成像能够获得高达83.4的肿瘤/正常组织信号比(Tumor to Normal tissue Ratio)——这一数值是荧光成像的33倍。
ATP生物发光技术以测量萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,FL)和荧光素反应产生的光的数量为基础,为广泛范围内的物质提供简单、快速、高灵敏度的分析方法"。在食品卫生领域由于ATP 生物发光技术无需培养过程,操作简便,灵敏度高,数分钟内可得到结果,具有其他微生物检测方法无法比拟的优势,是目前检测微生物快速的方法。其关键技术包括ATP发光试剂、样品预处理技术和发光检测仪三大部分。ATP生物发光试剂主要由萤火虫荧光素酶(FL)及其发光底物萤火虫荧光素(LH2)、酶和发光稳定剂、细胞ATP提取剂及样品预处理剂等组成。萤火虫荧光素酶是ATP生物发光试剂的关键组分之一,虫光素酶的活力和纯度决定了ATP生物发光试剂的性能,同时ATP发光试剂的检测灵敏度和检测数据的重现性与虫光素酶试剂的性能关系密切,研发ATP生物发光试剂的关键点主要集中在提高发光试剂的检测灵敏度和性能、增加产品的适应性等方面。
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