细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础。其中，细胞传代是将部分细胞分离出来，重新接种到新的培养皿中，使细胞重新获得足够的营养条件和生长空间的过程。那么你知道细胞传代培养的常见问题有哪些吗？让我们一起来看看吧！

　　1、细胞何时进行传代

　　通常当细胞生长至w全汇合进行传代，避免细胞生长过密，对于特殊情况，比如有接触抑制的细胞，一般在密度70-80%就进行传代，避免引起细胞分化。

　　2、贴壁细胞胰酶消化如何控制时间

　　贴壁细胞培养一个关键步骤胰酶消化，消化过度会导致细胞碎片增多，细胞成片脱落，严重影响细胞活性，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失，消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打造成细胞损伤，活性下降。

　　一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要对于新购买的细胞，可以先用低浓度的胰酶去摸索一下消化时间，可每隔1分钟镜下观察细胞是否变圆，记录最佳消化时间，下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。

　　3、如何看活细胞

　　可通过显微镜观察：活细胞中间透亮，饱满，有光泽，死细胞较暗。或通过台盼蓝染色来计算细胞活力，活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。有细胞计数仪的，可直接用计数仪计数。

　　4、细胞传几代开始死亡或细胞存活率不佳，增值变慢

　　可能是培养基使用错误或培养基品质不佳；血清使用错误或血清的品质不佳；或者消化过度，对细胞有严重影响；或者是传代比例不合适；细胞存在污染等。

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