磁珠法核酸提取都分为哪几个步骤?
核酸作为一切分子生物学研究的基础,其提取通常是开启生物学研究的第一步,而且提取的核酸质量高低也是决定下游实验成败的关键因素之一。常见的核酸提取方法有酚氯仿抽提法、高盐沉淀法、柱式法和磁珠法,其中,磁珠法核酸提取都分为哪几个步骤?让我们一起来看看吧!
第一步:裂解
核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来,细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。其中,酶作用主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或链霉蛋白酶)以使细胞破裂,核酸释放。蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离。
第二步:结合
磁珠表面带负电荷,磁珠buffer是高盐环境有带正电荷的盐离子,样本被buffer影响,磷酸基团带负电荷。
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