普鲁士蓝染色液的三种染色方法及注意事项
普鲁士蓝反应(Prussihaiblue reaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞或间质内,生成一种不溶解的蓝色化合物即三 价铁的亚铁化物。普鲁士蓝染色液主要用于显示细胞中铁离子,常见于吞噬细胞内,可以很好地区分含铁血黄素与其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广, 可以进行复染。
普鲁士蓝细胞染色
自备材料：
1、固定液：10%中性福尔马林、4%多聚甲醛等。
2、系列乙醇
普鲁士蓝三种染色种类及制备方法
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染色种类
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制备方法
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石蜡切片染色
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1、组织固定于10%中性福尔马林，常规脱水包埋。
2、切片厚度4μm，常规脱蜡至水。
3、蒸馏水水洗 1min。
4、切片入Perls stain(见注意事项2)，浸染15～30min。
5、蒸馏水充分冲洗2～5min。
6、入核固红染色液，淡染细胞核5～10min。
7、自来水冲洗1～5s。
8、常规脱水透明，中性树胶封固
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冰冻切片染色
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1、无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min。
2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，时间可以相应缩短。
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细胞染色
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1、4%多聚甲醛固定10～20min。
2、自来水冲洗2次，每次2min。
3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，时间可以相应缩短
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普鲁士蓝染色注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净。组织固定常采用10%中性福尔马林，经普通福尔马林长期固定后，组织会有损伤。避免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
2、整个操作过程中容器要干净，避免用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。Perls stain 染色时，应根据样本情况调整着色时间。
3、所有切片都应使用同一个阳性对照切片，选择适合的对照非常重要。尸检肺组织是一个很好的对照，包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞)。
4、冰冻切片和细胞染色，根据具体情况摸索实验条件。
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