牛奶外泌体装载miRNA204的制备：
电转外泌体装载 miRNA204： 400 nmolL -1 miRNA204 与 640 μg 牛奶外泌体混
合于 400 μL 电转缓冲液中， 样品与电击杯冰浴 10 min， 样品中不能有气泡。 电击杯放
入电极间进行放电， 电压 350 V， 脉冲时间累计 10 ms。 电击结束后样品置于 37 o C 恒温
箱中 20 min， 恢复牛奶外泌体膜结构。 由于 miRNA 是线性分子， 选用 10 kDa 的微量超
滤管纯化， 超滤管先用 DEPC 水于 7000 rmin -1 润洗 10 min。 样品于 7000 rmin -1 超滤纯
化得到装载 miRNA204 的牛奶外泌体（mExo-miRNA204） 样品。 所有操作在避光、 低
温以及无 RNA 酶环境下进行。
牛奶外泌体装载miRNA204的表征：
牛奶外泌体对 miRNA204 装载能力的表征： 用多功能酶标仪进行荧光定量，激发波长 490 nm， 发射波长 520 nm， 绘制荧光强度与 miRNA204 浓度的标准曲线（图1）。 miRNA 包封率计算公式如下：
图1
纯化后样品 mExo-miRNA204 与等量游离的 miRNA204 进行琼脂糖凝胶电泳， 78 V
电泳 25 min 后用凝胶成像仪拍摄荧光图像。
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