两种常用蛋白纯化的方法(Ni柱亲和层析和离子交换层析)

蛋白纯化技术是生物研究领域的一项重要技术。要研究某一个特殊蛋白质，首先就要将这个蛋白从生物体中分离纯化出来。蛋白纯化方法主要是利用不同蛋白质间的相似性与差异，依据蛋白间的相似性可以去除非蛋白物质，再根据蛋白质的差异性将目的蛋白分离出来。在本文中，我们将介绍2种常用的蛋白纯化的方法。

一、Ni柱亲和层析

1、自制的简易柱子，直径约为1cm，长度约为2cm，在柱子的下端加入蒸馏水，并关闭柱子的出口。

2、将琼脂糖凝胶倒入柱子，让填料自然沉降，依次用二到五倍的柱子体积的无菌水、8mol/L的尿素、无菌水洗柱子。

3、缓慢加入5ml的硫酸镍，至柱子的颜色由白色变为蓝色，待蓝绿色收集液体滴下来为止。

4、用二到五倍体积的PBS缓冲液平衡柱子，再将粗蛋白样品进行上样，用梯度浓度50mmol/L、70mmol/L、150mmol/L、250mmol/L咪唑进行过柱，流速约为1ml/min。

5、以每个浓度用1.5ml的Eppendorf收集八管，再用二到五倍体积的无菌水洗柱子，再用二到五倍的50mmol/L的EDTA洗柱子，除去NiSO4，待至无色状态

6、用多倍体积的无菌水进行洗柱子，将手机液10%的分离胶进行SDS—PAGE分析。

 

 二、离子交换层析

1、将macro prep High-Q强阴离子交换填料混匀，吸取16 ml于小烧杯中，静置待填料沉降至烧杯底部，吸取并弃去上清。

2、在烧杯中加入4倍体积的ddH2O，混匀，静置，沉降后去上清。重复2次以充分洗去保存填料中的乙醇。

3、在空柱中加入柱体积10%的装柱缓冲液，静置除去可能存在于柱壁和柱底部薄膜上的气泡。

4、以1:1（v/v）比例在烧杯中加入装柱缓冲液（20 mM sodium phosphate, pH 7.0, 1 M NaCl），混匀。用玻璃棒引流加入至柱中，并用装柱缓冲液填满剩余柱体积。静置30 min。

5、待填料均沉降至柱底部后，将适配器以较小的倾斜角度插入至柱中填料顶部。

（1）打开柱低端开口，以较大流速10 ml/min泵入装柱缓冲液，压实填料。

（2）缓慢降低缓冲液的流速，并将装柱缓冲液更换成结合缓冲液（20 mM sodium phosphate, pH 7.0）。

（3）设定蛋白纯化程序，使用15倍柱体积缓冲液线性梯度洗脱目的蛋白。

（4）收集流出液，进行SDS-PAGE检测。

上海金畔生物科技有限公司是可以提供一些列的蛋白类产品改性，荧光标记，偶连抗体 多肽或者聚合物或其他小分子偶连蛋白产品，我们也可以把一些无机纳米颗粒如纳米金棒，磁性纳米颗粒偶连蛋白。

牛血清白蛋白‑羟基磷灰石纳米粒子

苯胺红标记牛血清白蛋白(BSA)

188Re标记丙氧鸟苷白蛋白纳米微球

牛血清白蛋白(BSA)/槲皮素(QUE)纳米颗粒

牛血清白蛋白/魔芋多糖凝胶

胶体金标记牛血清白蛋白BSA

铕螯合物(CTTAA:Eu)标记牛血清白蛋白抗原

牛血清白蛋白修饰紫杉醇(BSA-PTX)

牛血清白蛋白分子修饰单晶硅

牛血清白蛋白-三聚氰胺偶联物

牛血清白蛋白修饰金纳米簇

氨基酸修饰牛血清白蛋白BSA

荆豆凝集素修饰牛血清白蛋白脂质体(UEAI-LIP)

牛血清白蛋白纳米管

糖基化修饰牛血清白蛋白(AGE-BSA)

牛血清白蛋白修饰发光碳量子点

BSA牛血清白蛋白修饰葡萄糖氧化酶

牛血清白蛋白修饰PLGA纳米粒

牛血清白蛋白修饰近红外荧光纳米金

纤维粘连蛋白修饰多孔PLGA

牛血清蛋白修饰CdTe量子点

Gold-BSA 牛血清白蛋白包裹纳米金

IR825-BSA 近红外染料标记牛血清白蛋白

(BSA-OA)油酸包裹牛血清白蛋白

牛血清白蛋白包裹二氧化硅核壳纳米粒子

牛血清白蛋白包裹四氧化三铁纳米粒子

牛血清白蛋白乳酸-羟乙酸共聚物微球

二氧化硅-牛血清白蛋白颗粒(SiO₂/BSA)

羟基偶联牛血清白蛋白(OH-BSA)

叠氮功能化牛血清白蛋白(N3-BSA)

氨基修饰牛血清白蛋白(NH2-BSA)

(BSA-MAL)马来酰亚胺功能化牛血清白蛋白

(BSA-Biotin)生物素修饰牛血清白蛋白

(BSA-SH)巯基功能化牛血清白蛋白

生物素-螺旋霉素A

HA-BSA ;透明质酸70K-牛血清白蛋白

生物素-转铁蛋白;Biotin-Trhaisferrin

2-辛炔酸-牛血清白蛋白;2-辛炔酸-BSA