核酸染料SYBR Green I
产品简介：
本品用DMSO溶解，因为DMSO熔点是18.3℃，使用前请放置到室温充分溶解。
产品特点：
1、无毒性：花菁染料，无致癌性。
2、高敏性：紫外凝胶透射仪观测灵敏度盖于EB染色法5-20倍，用可见光透射仪比紫外
光条件下的灵敏度比EB染色法高20-30倍。
3、信噪比高：样品荧光信号强，无背景信号。
4、操作简单：无须脱色或冲洗，即可用紫外凝胶透射仪观察或可见光透射仪观察
5、使用范围广：可适用于多种电泳分析，如琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
6、使用方便：不影响其他修饰酶左右（如：Taq 酶、内切酶、T4连接酶、反转录酶等）。
7、经济：价格比银染便宜（例如：1ml稀释10倍，即使10000ul可以使用10000次）。
操作步骤（仅供参考）：
一、胶染法（用法通EB）( 推荐方法，见图1)
1、制胶时加入SYBR Green I 核酸染料。冷却胶到 50℃左右，每 100ml 胶中加入1-3µl
SYBR Green I 核酸染料（见图 1）。
2、按照常规方法进行电泳即可。
3、用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，
可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
需要注意的是：此方法染色能准确确定片段分子量且用量较少。1ml 染料可以做 1000 块10 ml 胶，每块胶点50个样，可做50000次。
二、点染法（见图3）
1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2、工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR Green I 稀释100倍，即为SYBR Green
I 工作液。SYBR Green I 工作液可以置2～8℃保存一个月以上， 浓缩液在-20℃保存半年。
3、制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
4、样品染色：向分析样品中加入SYBR Green I 工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，
使SYBR Green I 与样品中DNA充分结合。SYBR Green I 工作液加入量为总上样量的1/5～
1/10。
5、DNA Marker染色：将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μL SYBR Green
I 工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR Green I 与DNA充分结合。
6、上样、电泳：按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻
璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
注意：用点染法染色时，灵敏度最高，染料用量最少。通常点一个样加入 1µL 即可，可以
使用 10000 次， 但大片段稍有滞后现象，如果需要更准确确定分子量(与Marker对比)，建议使用胶染法。
三、泡染法
1、按照常规方法进行制胶，其中不含任何染料。
2、用 pH 7.0 – 8.5 的缓冲液(如：TAE， TBE)，按照 1﹕1000 的比例稀释SYBR Green
I 核酸染料，混匀，制成染色溶液。
3、将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室
温振荡染色 10-30 分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平
皿上染色，将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上，让稀释液均匀地覆 盖整个胶板，并染色 30
分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。
4、用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃，观测聚丙烯酰胺凝胶时，
可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
需要注意的是：用泡染方法染色时，可以精确确定核酸片段分子量。但是三种方法中染料用量最大的。
几种染色方法特点比较:
储存条件：2-8℃避光干燥可保存24个月
注意事项：
1、 Sybr Green 核酸染料样品点染方法中，电泳不要超过 2 小时，以免核酸染料从 DNA/RNA 上分离出来，产生弥散状条带。
2、用点染方法染色时，条带稍有滞后现象，如果需要确定片段精确分子量（和 Marker 对比），建议用胶染法和泡染法。
3、常规用酒精沉淀核酸过程中，SYBR Green I 核酸染料可以全部从核酸上去掉。
4、DNA电泳请选择SYBR Green I 染料，RNA 电泳请选择SYBR Green II染料，两种染料不通用。
5、SYBR Green I 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染 色等使用过程中用聚丙烯类容器。
可以加Orhaige Red 作为标记. pH值在7.5-8.3之间,不要微波加热,加入热胶的温度低于50度。
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