FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100T

上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: F6012S/F6012M/F6012L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):220/737/1244

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

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产品概述:

产品内容:

组分

  F6012S10T

  F6012M50T

  F6012L100T

   A. 1× Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. FITC-Annexin V

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL

储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 nm
PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

FITC-Annexin V/PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色)检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用绿色荧光探针FITC标记的Annexin V,即FITC – Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,FITC – Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种DNA结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488、532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 FITC-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T UE-F6012S/F6012M/F6012L    
MSDS:

MSDS F6012 FITC-Annexin V&PI
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100TFITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。
使用本产品的文献:

1.MTP18 overexpression contributes to tumor growth and metastasis and associates with poor survival in hepatocellular carcinoma
Zhang, Yu Li, Hui Chang, Hulin Du, LixUE  Hai, Jun Geng, Xilin Yan, Xiang
cell death and disease(2018) 
应用方向:流式细胞仪检测:SMMC7721和 HLF 细胞的凋亡

2.
MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、凋亡、细胞周期以及迁移的影响
刘腾飞,周建康,黄团结,王亚苹,周馨魁,张 乐,张璐玉,陈一豪,刘红涛,关方霞,马珊珊
郑州大学学报(医学版)(2018) 5 547-552
应用方向:流式细胞仪检测:食管鳞癌KYSE-70细胞的凋亡

3.
Histone deacetylases inhibitor MS‐275 suppresses human esophageal squamous cell carcinoma cell growth and progression via the PI3K/Akt/mTOR pathway
Shanshan Ma  Tengfei Liu  Ling Xu  Yaping Wang  Jiankang Zhou  Tuanjie Huang  Peng Li  Hongtao Liu Yanting Zhang  Xinkui Zhou  Yuanbo Cui  Xingxing Zang  Yuming Wang  Fangxia Guan
Journal of Cellular Physiology (23 May 2019)
应用方向:细胞凋亡检测:食管鳞状癌细胞(ESCC)

4.
SDHC-related deficiency of SDH complex activity promotes growth and metastasis of hepatocellular carcinoma via ROS/NFκB signaling
JibinLi,NingLiang,XiaoyuLong,JingZhao,JinYang,XiaohongDu,TaoYang,PengYuan,XiaojunHuang,JianshengZhang,XianliHe,JinliangXing
Cancer Letters Volume 461, 1 October 2019, Pages 44-55
应用方向:细胞凋亡检测::肝细胞癌(HCC)

5.
MTFP1 overexpression promotes the growth of oral squamous cell carcinoma by inducing ROS production
Tingying Xiao,Jian Sun,Zhankui Xing,Fuqiang Xie,Lan Yang,Wenjuan Ding
CELL BIOLOGY INTERNATIONAL
应用方向:细胞凋亡检测:口腔鳞状细胞(OSCC)

6.ALG-2 couples T cell activation and apoptosis by regulating proteasome activity and inflUEncing MCL1 stability
Tian-Sheng He, Wangsheng Ji, Junqi Zhang, Jing Lu,Xinqi Liu 
Cell Death & Disease(11, Article number: 5 (2020))

7.Over‐expression of TFB2M facilitates cell growth and metastasis via activating ROS‐Akt‐NF‐κB signaling in hepatocellular carcinoma
Xilin Geng,Zhimin Gen,Hui Li,Yu Zhang,Jibin Li,Hulin Chang
liver international

8.CRIF1 overexpression facilitates tumor growth and metastasis through inducing ROS/NFκB pathway in hepatocellular carcinoma
Hulin Chang,Juntang Li,Kai Qu,Yong Wan,Sinan Liu,Wei Zheng,Zhiyong Zhang,Chang Liu
 Cell Death & Disease volume 11, Article number: 332 (2020) 

9.Caffeine Targets G6PDH to Disrupt Redox Homeostasis and Inhibit Renal Cell Carcinoma Proliferation
Huanhuan Xu,Lihong Hu, Titi Liu1, Fei Chen, Jin Li, Jing Xu, Li Jiang, Zemin Xiang, Xuanjun Wang,Jun Sheng
Frontiers in Cell and Developmental Biology

10.A Network Pharmacology Approach to Investigate the Anticancer Mechanism and Potential Active Ingredients of Rheum palmatum L. Against Lung Cancer via Induction of Apoptosis
Qing Zhang, Jia Liu, Ruolan Li, Rong Zhao, Mengmeng Zhang, Shujun Wei, Dong Ran, Wei Jin, Chunjie Wu
Frontiers in Pharmacology

11.MIEF2 over-expression promotes tumor growth and metastasis through reprogramming of glucose metabolism in ovarian cancer
Shuhua Zhao, Xiaohong Zhang, Yuan Shi, Lu Cheng, Tingting Song, Bing Wu, Jia Li & Hong Yang
Journal of Experimental & Clinical Cancer Research

12.Repurposing Erythrocytes as a “Photoactivatable Bomb”: A General Strategy for Site-Specific Drug Release in Blood Vessels
Ya-Xuan Zhu,Hao-Ran Jia,Yuxin Guo,Xiaoyang Liu,Ningxuan Zhou,Peidang Liu,Fu-Gen Wu
Small

13.Multienzyme-like Reactivity Cooperatively Impairs Glutathione Peroxidase 4 and Ferroptosis Suppressor Protein 1 Pathways in Triple-Negative Breast Cancer for Sensitized Ferroptosis Therapy
Ke Li, Chuanchuan Lin, Menghuan Li, Kun Xu, Ye He, Yulan Mao, Lu Lu, Wenbo Geng, Xuemin Li, Zhong Luo, Kaiyong Cai
ACS Nano

14.A multiple functional supramolecular system for synergetic treatments of hepatocellular carcinoma
LijingSun, LiyuanChen, KeYang, Wei FengDai, YeYang, XiumingCui, BoYang, ChengxiaoWang
International Journalof Pharmaceutics

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: A6030S/A6030M/A6030L 规格: 10T/50T/100T

上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: A6030S/A6030M/A6030L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):264/995/1474

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

组分  

规格

 A6030S10T

 A6030M50T

 A6030L100T

A. 1×Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. Annexin V-APC

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
Annexin V-APC: Ex/Em = 650/660 nm
PI: Ex/Em=535 nm/617 nm (with DNA)

产品介绍
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用远红外荧光蛋白APC标记的Annexin V,即Annexin V-APC,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,Annexin V-APC则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合,从而也使坏死细胞呈现远红外荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。


注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-APC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T UE-A6030S/A6030M/A6030L    
MSDS:

MSDS A6030 Annexin V-APC&PI
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100TAPC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T


免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。
使用本产品的文献:

参考文献
1.Terminating the criminal collaboration in pancreatic cancer: Nanoparticle-based synergistic therapy for overcoming fibroblast-induced drug resistance.
应用方向:检测胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的凋亡

2.Ribosomal protein L23 negatively regulates cellular apoptosis via the RPL23/Miz-1/c-Myc circuit in higher-risk myelodysplastic syndrome.
应用方向:检测高危骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34+细胞的凋亡

3.Chlamydia trachomatis plasmid-encoded protein Pgp3 inhibits apoptosis via the PI3K-AKT-mediated MDM2-p53 axis.
应用方向:检测Hela细胞的凋亡

Propidium Iodide (碘化丙啶,PI) 货号: P4034 规格: 50 mg

上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

Propidium Iodide (碘化丙啶,PI)

产品货号: P4034

产品规格: 50 mg

目录价(元):400

推荐仪器:荧光显微镜

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产品概述:

产品参数
外观:可溶于水或DMSO的橙红色固体
Ex/Em(结合DNA)=535/617 nm
Ex/Em(未结合DNA)=493/636 nm
CAS号:25535-16-4
分子式:C27H34I2N4
分子量:668.4
分子结构图:
Propidium Iodide (碘化丙啶,PI) 货号:               P4034  规格:               50 mg

储存条件
4℃避光保存,有效期见外包装。

产品介绍

Propidium Iodide(碘化丙啶,PI)是一种核酸荧光染料,可用于哺乳动物、细菌、酵母的染色。它不能透过活细胞膜,但能够透过死细胞和凋亡中晚期细胞的细胞膜而使细胞核染色。因此,PI作为荧光探针常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测。进入细胞后,PI与DNA和RNA结合,荧光强度增强20-30倍。在流式细胞分析中,PI常与其他染料如 Calcein-AM、Hoechst 33258或Hoechst 33342联合使用,来区分凋亡早晚期细胞以及死细胞。此外,PI也常作为多色荧光染色的复染剂使用。
以贴壁细胞(96孔板)举例,每孔100 μL染色工作液,染色工作液浓度5 μM计算,50 mg配置为工作液大概可以用于149611个孔的染色。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. PI被普遍认为具有致癌性,请注意适当防护。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

Propidium Iodide (碘化丙啶,PI) 货号:               P4034  规格:               50 mg UE-P4034    
常见问题解答:

需要将PI染色后的样品冻存起来,请问是放在-4℃还是-20℃冻存啊?

4℃避光,不宜长时间保存。

染冰冻脑切片需要腹腔注射染么?
不需要腹腔注射,可以直接染切片样本,该产品仅仅是作为试剂原料提供,不提供详细的使用方法,具体的操作最好参考相关的文献确定。

做细胞的免疫荧光,用多聚甲醛处理后,需要用RNase处理,才能用PI染色吗?
如果做细胞周期,需要RNase A处理。其他的免疫荧光染色的细胞核染色,不需要的。

表达红色荧光蛋白的细胞经PI染色后做流式会有影响吗?
两种荧光有重叠,会干扰结果的判断。


使用本产品的文献:

参考文献
1.DRP1 upregulation promotes pancreatic cancer growth and metastasis through increased aerobic glycolysis
应用方向:细胞流式&周期检测

2.Histone deacetylases inhibitor MS‐275 suppresses human esophageal squamous cell carcinoma cell growth and progression via the PI3K/Akt/mTOR pathway
应用方向:细胞流式&凋亡检测

3.Identification and characterization of two subpopulations of Encephalitozoon intestinalis
应用方向:细菌染色

4.Analysis and isolation of embryonic mammalian neurons by fluorescence-activated cell sorting
应用方向:细胞染色

Oxazole yellow/PI 膜透性凋亡检测试剂盒 货号: Y6077S/Y6077L 规格: 50T/100T

上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

Oxazole yellow/PI 膜透性凋亡检测试剂盒

产品货号: Y6077S/Y6077L

产品规格: 50T/100T

目录价(元):930/1700

推荐仪器:流式细胞仪、荧光显微镜

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产品概述:

产品组分:

组分

Y6077S (50T)

Y6077L (100T)

A. Oxazole yellow dye

50 µL

100 µL

B. Propidium Iodide (PI)

50 µL

100 µL

注:Oxazole yellow dye:Ex/Em = 491/509 nm(结合DNA);

      Propidium Iodine:Ex/Em = 535/617 nm (结合DNA)

储存方法
4℃避光保存,有效期见外包装。对于长时间保存,可将Oxazole yellow dye保存在-20℃。

产品介绍

细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细细胞凋亡(Apoptosis)一般是指机体细胞在发育过程中或在某些因素作用下通过细胞内基因及其产物的调控而发生的一种程序性细胞死亡过程,细胞坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。细胞凋亡与坏死的区别在于特征性的形态学和生物化学变化,包括细胞膜通透性与核染色质的变化,细胞质的收缩及膜不对称的丧失。
本公司生产的Oxazole yellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒,是一种基于Oxazole yellow和PI两种染料的双荧光法检测凋亡的试剂盒。本试剂盒适用于荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪及其它荧光检测系统。
Oxazole yellow是一种非细胞膜穿透性的并对DNA具有高亲和力的羰花青单体绿色荧光染料,在没有与DNA结合的时候基本上没有荧光,而与DNA结合后可以发出明亮的绿色荧光。在细胞凋亡发生时,细胞膜通透性发生改变,此时Oxazole yellow可以进入细胞内与DNA结合,发出明亮的绿色荧光,因此常用于细胞凋亡的检测。需要注意的是Oxazole yellow也能染色死细胞,因此需要和对死细胞特异性荧光染色的PI进行双染才能有效判定细胞凋亡。
PI(碘化丙啶,Propidium Iodide)是⼀种可对DNA染⾊的红色荧光染料,是⼀种溴化⼄啶的类似物,在嵌⼊双链DNA后释放红⾊荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过死细胞破损的细胞膜⽽对核染⾊。因此,Oxazole yellow与PI联合使用,可直接用于细胞凋亡的检测,凋亡细胞呈现绿色荧光,死细胞同时呈现红色和绿色荧光阳性,活细胞很少或几乎没有荧光。

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

Oxazole yellow/PI 膜透性凋亡检测试剂盒 货号:               Y6077S/Y6077L  规格:               50T/100T UE-Y6077S/Y6077L    
MSDS:

MSDS Y6077 Oxazole yellow and PI Membrane Permeability Apoptosis Detection Kit
使用本产品的文献:

参考文献
1.Chlorophenols and chlorocatechols induce apoptosis in human lymphocytes (in vitro)
应用方向:细胞凋亡检测:淋巴细胞

2.Vitamin D(3)-induced apoptosis of murine squamous cell carcinoma cells. Selective induction of caspase-dependent MEK cleavage and up-regulation of MEKK-1
应用方向:细胞凋亡检测:鼠鳞状癌细胞

3.Epigenetic inactivation of the premature aging Werner syndrome gene in human cancer
应用方向:细胞凋亡检测:结肠癌细胞(HCT-116和COLO-205),乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)和白血病细胞(HL-60,U937和REH)

4.Comparison of apoptosis and mortality measurements in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) using multiple methods
应用方向:细胞凋亡检测:外周血单核细胞

5.HSV and glycoprotein J inhibit caspase activation and apoptosis induced by granzyme B or Fas
应用方向:细胞凋亡检测:Jurkat 和 Vero cells

PI-PspI 货 号 #R0695S NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 限制性内切酶 – 归位内切酶

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货 号
规 格
价 格(元)
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苏州库存

#R0695S
500 units
789.00

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  • single letter code

在不同反应缓冲液的活性

NEBuffer 1.1: <10%
NEBuffer 2.1: 10%
NEBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 10%

特性

重组酶。

反应条件

Pl-Pspl 反应缓冲液+ BSA,65℃。

特异性

该内切酶的靶序列或识别位点如下所示:

PI-PspI                   货   号                  #R0695S

浓度

5,000 units/ml。

37℃ 时活性

5%。

注意事项

归位内切酶没有严格定义的识别序列。

参考文献

有关该产品特性及应用详情请联系我们。:www.neb-china.comwww.neb.com

PI-SceI 货 号 #R0696S NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 限制性内切酶 – 归位内切酶

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货 号
规 格
价 格(元)
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#R0696S
250 units
789.00

Download:       

  • isoschizomers     |
  • compatible ends     | 
  • single letter code

在不同反应缓冲液的活性

NEBuffer 1.1: <10%
NEBuffer 2.1: <10%
NEBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: <10%

特性

重组酶。

反应条件

PI-SceI 反应缓冲液 + BSA,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。

特异性

该内切酶的靶序列或识别位点如下所示:

PI-SceI                  货   号                  #R0696S

浓度

5,000 units/ml。

注意事项

归位内切酶没有严格定义的识别序列。

参考文献

有关该产品特性及应用详情请联系我们。:www.neb-china.comwww.neb.com

PI [Propidium iodide], 25535-16-4

PI [Propidium iodide], 25535-16-4

Propidium Iodide(碘化丙啶,PI)是一种核酸荧光染料,可用于哺乳动物、细菌、酵母的染色。它不能透过完整的细胞膜,但能够透过死细胞和凋亡中晚期细胞的细胞膜而使细胞核染色。因此,PI 作为荧光探针常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测。进入细胞后,PI 与 DNA 和 RNA 结合,荧光强度增强 20-30 倍。

产品名称 PI [Propidium iodide], 25535-16-4
中文名称 碘化丙啶
英文名称 Propidium iodide
CAS 25535-16-4
分子式 C27H34I2N4
分子量 668.39
存储条件 -20°干燥避光
保存时间 一年
Ex/Em(nm) 535/617

PI单染色法原理及操作步骤

PI单染色法原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变具有很大的特征性。

荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测,英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物,在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。

PI单染色法原理及操作步骤

PI单染色法实验原理

1. 细胞核的改变:由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明,用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA可染性降低。许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。

2. 光散射特性:凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。在流式细胞仪上,前散射光与细胞的大小有关,而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用,与细胞内的颗粒多少有关。在细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,故前散射光降低,这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。此外细胞凋亡时由于染色体降解,核破裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞侧散射光常增加。细胞坏死时,由于细胞肿胀,其前散射光增大;侧散射光在细胞坏死时也增大,因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。但需要注意的是,根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好,而在肿瘤细胞凋亡中,其可靠性就较差。根据光散射特性检测凋亡细胞主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来,用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。也可用于活细胞的分类。

需要的试剂和仪器10:05:01

1, PBS溶液;

2, PI染液:将PI溶于PBS(pH7.4)中,终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。

3,70%乙醇 4,400目筛网  5, 流式细胞仪

实验步骤

1. 收集细胞{数目约(1~ 5)×106个/mL},500 ~ 1000 r/min离心5min,弃去培养液。

2. 3ml PBS洗涤1次。

3. 离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小时。

4. 离心弃去固定液,3mlPBS重悬5min。

5. 400目的筛网过滤1次,500—1000r/min离心5min,弃去PBS。

6. 用1ml PI染液染色,4℃避光30min。

7. 流式细胞仪检测:PI用氩离子激发荧光,激光光波波长为488nm,发射光波波长大于630nm,产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。

8. 结果判断:在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上,凋亡细胞与正常细胞相比,前散射光降低,而侧散射光可高可低,与细胞的类型有关;在分析PI荧光的直方图时,先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片,在PI荧光的直方图上,凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0,则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45,可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准,两者分别为0.35和0.7,可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。

PI单染色法原理及操作步骤

注意事项:细胞凋亡时,其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一,但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低,或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。

上海金畔生物科技有限公司在抗氧化方面的检测及科研试剂盒拥有自己的专业技术团队,现有产品主要包括有病理染色液(巴氏染色液 革兰氏染色液、DAB染色液)及细胞核染色、线粒体染色、微生物染色液等多种相关染色液产品,我公司自产的产品纯化纯度高达98%+以上并可以提供液相图谱来佐证纯度,并且提供相关技术指导服务。

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以上内容来自金畔