肿瘤组织的原代细胞培养有哪些注意事项？

原代培养是直接从生物体组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。肿瘤组织的原代细胞培养技术为肿瘤研究及治疗提供充足的细胞来源是癌症在体外研究的重要工具，与体内研究相辅相成。但目前肿瘤细胞原代培养成功率不高的许多问题还需继续探讨与研究。肿瘤组织的原代细胞培养有哪些注意事项？让我们一起来看看吧！

注意点一：取材部位的选择非常重要，应在癌细胞集中、细胞活力较好的部位取材，尽量避免在坏死区取材；

注意点二：取材后应尽快培养，最好不要超过24h，如需耽搁时间，可将组织块于培养液中浸泡，放置于冰浴或4℃冰箱；

注意点三：癌组织周围的血液、脂肪等正常的组织应去除，可以保证癌细胞的纯度；

注意点四：取材方法：获取的组织块最好能有指尖大小，太小了可能养不起来，因为细胞有生物学环境，细胞多了长得也会快，如果细胞密度太低了，细胞很难长起来，可能的原因是细胞分泌的生长因子。

注意点五：切碎癌组织时，可用眼科剪，也可用小刀，避免用大剪刀，所用刀剪要锋利，以免挫伤细胞。

注意点六：分散细胞的方法：机械和药物两种方法。癌组织不同与正常组织，单纯用机械的剪碎办法，癌细胞就可以游离出来，成为细胞悬液。常用胰蛋白酶、EDTA消化分离。如果从含有大量坚硬的结缔组织分离癌细胞，胶原纤维不能被胰蛋白酶和EDTA消化，则使用胶原蛋白酶消化，如：原代黑色素瘤细胞，黑色素瘤一般长在肢端，肢端的角质层太厚，就需要胶原蛋白酶消化。

注意点七：接种数量要足够，造成培养细胞所必须的生物学环境；

注意点八：更换培养液的时可换半量或1/4量，将pH维持在7.2-7.4；

注意点九：新配试剂要做无菌实验，严格无菌操作，防止污染，新手建议不要直接养原代，先拿实验室的肿瘤细胞养养练练手；

注意点十：若组织在消化时间较长时仍未散开，可采用多次提取消化法以减少酶对已消化下来的细胞的损伤；

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从我不是药神说到血液肿瘤培养基

7月5日，北京法院审判信息网公开的一则一审民事判jue书显示，北京坏猴子文化产业发展有限公司被诉，未经许可在电影《我不是药神》中使用了原告张某拍摄的印度新德里建筑物照片。法院认为，涉案电影中使用的照片与原告涉案作品画面结构、色彩、拍摄角度、光影基本一致。法院一审认定被告侵权。判jue书显示，被告停止涉案侵权行为，赔偿原告张某经济损失2万元并致歉。

我不是药神被诉侵权一审被判赔，让人不禁联想到了《我不是药神》这部电影：一位不速之客的意外到访，打破了神油店老板程勇的平凡人生，他从一个交不起房租的男性保健品商贩，一跃成为印度仿制药“格列宁”的代理商。收获巨额利润的他，生活剧烈变化，被病患们冠以“药神”的称号。但是，一场关于救赎的拉锯战也在波涛暗涌中慢慢展开……
格列ning,也叫Gleevec，是一种明星抗癌药。它所针对的病症是慢粒白血病。格列ning能够把慢粒白血病变成一种仅需要规范服药就能够控制病情的慢性病，算是一种救命药，延长病人的生存时间，减少病痛的折磨。但是格列ning的价格昂贵，一般的家庭无法承受。
对于这种血液肿瘤类的疾病，一直都是研究者们关注的重点，如何研发有效的产品，并将产品应用到临床上。
上海金畔生物科技有限公司提供多款血液肿瘤类培养基，助力血液肿瘤类疾病的实验研究。

肥胖会抑制免疫细胞的功能，加速肿瘤生长

高脂肪饮食导致的肥胖，使癌细胞在与免疫细胞争夺代谢“燃料”的战斗中胜出，肥胖会损害免疫细胞功能，加速肿瘤生长 。

肥胖症已在世界范围内达到流行病的程度，并影响了40％以上的美国成年人。肥胖与超重超过十二种不同类型的癌症的风险以及预后和生存率降低有关。多年来，科学家已经发现了与肥胖相关的可导致肿瘤生长的过程，例如代谢变化和慢性炎症，但对肥胖与癌症之间相互作用的详细了解仍然难以捉摸。

2020年12月9日，哈佛医学院的研究人员在顶刊《 Cell 》上在线发表了题为” Obesity Shapes Metabolism in the Tumor Microenvironment to Suppress Anti-Tumor Immunity “的研究，表明高脂肪饮食导致的肥胖，使癌细胞在与免疫细胞争夺代谢“燃料”的战斗中胜出，肥胖会损害免疫细胞功能，加速肿瘤生长 。

研究小组给小鼠提供了正常或高脂饮食，高脂饮食会导致体重增加和其他与肥胖有关的变化。然后，研究了肿瘤内部和周围的不同细胞类型和分子。

研究人员发现， 与普通饮食相比，高脂饮食中动物的肿瘤生长更快 。 但这仅发生在具有免疫原性的癌症类型中，其中可能包含大量的免疫细胞。更容易被免疫系统识别，并且更有可能引发免疫反应。

实验表明，饮食相关的肿瘤生长差异特别取决于CD8+ T细胞的活性。如果通过实验消除小鼠的CD8+ T细胞，饮食不会影响肿瘤的生长速度。

令人惊讶的是，高脂饮食只是减少了肿瘤微环境中CD8+ T细胞的数量，而人体其他部位的CD8+ T细胞数量并未减少。保留在肿瘤中的那些则不那么坚固，它们分裂得更慢并且具有降低的活性的标志。但是，当这些细胞被分离并在实验室中生长时，它们具有正常的活性，这表明肿瘤中的某些物质削弱了这些细胞的功能 。

高脂饮食会干扰CD8+ T细胞的代谢

团队还遇到了 一个非常明显的矛盾：在肥胖动物体内，尽管其他部位依然富含脂肪，但肿瘤微环境中关键的游离脂肪酸（细胞的主要燃料来源）却已被耗尽。

这一发现促使研究人员在正常和高脂饮食条件下，编制了一份有关肿瘤中不同细胞类型的代谢谱的综合图集。

分析显示，癌细胞适应了脂肪供应的变化。在高脂饮食下，癌细胞能够重新编程其新陈代谢以增加脂肪的摄取和利用，而CD8+ T细胞则不能。终耗尽了肿瘤微环境中的某些脂肪酸，使T细胞无法获得这种必需的燃料。

通过分析，研究小组确定了与饮食有关的肿瘤微环境中癌症和免疫细胞代谢途径的许多变化。

高脂肪饮食抑制了肿瘤内CD8+ T细胞的增殖和活性

特别令人感兴趣的是PHD3，这种蛋白质在正常细胞中已被证明可以阻止过多的脂肪代谢。与正常环境相比，肥胖环境中的癌细胞PHD3表达明显降低。当研究人员强迫肿瘤细胞过度表达PHD时，他们发现这降低了肥胖小鼠的肿瘤吸收脂肪的能力。它还恢复了肿瘤微环境中关键游离脂肪酸的可用性。

PHD3表达的增加在很大程度上逆转了高脂饮食对肿瘤免疫细胞功能的负面影响。与低PHD3的肿瘤相比，高PHD3的肿瘤在肥胖小鼠中的生长较慢，这是CD8+ T细胞活性增加的直接结果。在缺少CD8+ T细胞的肥胖小鼠中，肿瘤生长不受PHD3表达差异的影响。

增加肿瘤细胞中 PHD3 的表达，可提高CD8+ T活性，抑制肿瘤生长

该小组还分析了人类肿瘤数据库，发现低PHD3表达与免疫学上“寒冷”的肿瘤有关。作者认为，肿瘤脂肪代谢在人类疾病中起作用，肥胖症降低了多种癌症类型的抗肿瘤免疫力。

作者说， CD8+ T细胞是许多有前途的精密癌症疗法的中心焦点，包括疫苗和细胞疗法如CAR-T。这些方法需要T细胞具有足够的能量来杀死癌细胞，但与此同时，我们不希望肿瘤具有生长的能量。

从更广泛的意义上讲，这些结果为更好地了解肥胖如何影响癌症以及患者新陈代谢对治疗结果的影响奠定了基础。虽然现在还无法确定PHD3是否是佳治疗靶标，但这一发现为通过其代谢脆弱性与癌症作斗争的新策略打开了大门。

总而言之，高脂饮食可以使癌细胞在免疫方面胜过免疫细胞，从而削弱免疫功能并加速肿瘤生长，阻止此机制可增强抗肿瘤免疫力。这些发现提出了针对癌症代谢和改善免疫疗法的新策略。

上海金畔生物科技有限公司提供人卵巢浆液性肿瘤相关成纤维细胞 ，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
人卵巢浆液性肿瘤相关成纤维细胞

product name：Human Ovarian Serous Tumor Carcinoma Associated Fibroblasts（人卵巢浆液性肿瘤相关成纤维细胞）；

cat no：ABC-TC5542；

Size/Quantity：1 vial；

Biosafety Level：1；

Shipping Info：Dry Ice；

Storage：Liquid Nitrogen；

Description：Serous carcinoma is a type of epithelial ovarian cancer, which is the most common kind of ovarian cancer. It is arises from the lining of a cavity that produces a serum-like fluid (a serous cavity).Carcinoma associated fibroblasts (CAFs) have recently been implicated in important aspects of epithelial solid tumor biology such as neoplastic progression, tumor growth, angiogenesis, and metastasis.Product is manufactured, tested and validated in an ISO 9001/ISO13485/CLIA certified facility.；

Quality Control：All cells test negative for mycoplasma, bacteria, yeast, and fungi；

Application：For research use only.

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上海金畔生物科技有限公司：

一、辐射五大服务方向：

国内试剂耗材经销代理；

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基因分型（SNP检测）：低/中/高通量项目；

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二、多家代理品牌，涉及30多种，经营代理500多个品牌：

Accegen、Intact Genomic、Sigma、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific……

所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷门品牌，价格优，货期短，可加急。大部分客户我们提供货到付款服务，上海金畔自成立依靠过硬的服务和良好的信誉与各大企事业单位、科研单位建立长期合作。

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人血红素肿瘤外周血单个核细胞

product name：Human Heme-Oncology Peripheral Blood Mononuclear Cells（人血红素肿瘤外周血单个核细胞）；

cat no：ABC-TC4327；

Size/Quantity：1 vial；

Biosafety Level：1；

Shipping Info：Dry Ice；

Storage：Liquid Nitrogen；

Description：Included Diagnoses: Lymphoma (including Non-Hodgkin and Hodgkin’s Lymphoma, B Cell Lymphoma, Burkitt’s Lymphoma, Diffuse Large B-Cell Lymphoma, Follicular Lymphoma, Mantle Cell Lymphoma), Leukemias (including ALL, CML, CLL), Mulitple Myeloma and others.；

Quality Control：All cells test negative for mycoplasma, bacteria, yeast, and fungi；

Application：For research use only.

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人肝癌分离肿瘤细胞

product name：Human Liver Cancer Dissociated Tumor Cells(人肝癌分离肿瘤细胞)；

cat no：ABC-HP032X；

Size/Quantity：1 vial；

Biosafety Level：1；

Shipping Info：Dry Ice；

Storage：Liquid Nitrogen；

Description：Dissociated Tumor Cells(人肝癌分离肿瘤细胞) are a single-cell suspension isolated from solid tumors by enzyme and mechanical separation. The cells are stored in cryopreservation medium.；

Quality Control：All cells test negative for mycoplasma, bacteria, yeast, and fungi；

Application：For research use only.

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