本文为一种具有靶向长循环的多级仿生纳米物载体的制备方法。一种具有靶向长循环的多级仿生纳米物载体的制备方法，包括：

(1)制备介孔二氧化硅；

(2)将抗癌物负载到介孔二氧化硅；

(3)采用生物素修饰红细胞膜；

(4)将生物素修饰后的红细胞膜包裹负载抗癌物的介孔二氧化硅。

具体操作步骤如下：

(1)制备介孔二氧化硅

2份正戊醇，4份TEOS(正硅酸乙酯)加入到30份环己烷中搅拌均匀，加入2.4份CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)和30份去离子水，搅拌后转移到聚四氟乙烯反应釜中，置于120℃烘箱里反应2小时，用去离子水洗涤三次，至于70℃空气中干燥一天得到白色粉末，然后550℃马弗炉烧结6h，即可得白色粉末的介孔二氧化硅(MSN)。

(2)制备负载抗癌物DOX的介孔二氧化硅：

将介孔二氧化硅和抗癌物DOX加入到水中(介孔二氧化硅、抗癌物DOX和水的质量比为5:1：20)，搅拌12h，通过静电作用负载上抗癌物，得负载抗癌物的介孔二氧化硅(MSN–DOX)。

3)制备红细胞膜：

全血采自雄性Balb/c小鼠。将采集的红细胞立即分散在PBS(pH＝7。4)中，胀破，离心分离，得到红细胞膜碎片(RBCm)。

(4)对红细胞膜进行生物素修饰：

将1份二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素(Bio–PEG–DSPE)与5份破碎的红细胞膜，在4℃下搅拌过夜，用微型挤出机通过200nm滤膜连续挤出，得生物素修饰后的红细胞膜(Bio–RBCm)。

本文技术方案制得生物素修饰红细胞膜包裹的载介孔二氧化硅纳米粒子，具有以下的优点：

(1)采用的介孔二氧化硅由正硅酸乙酯和十六烷基三甲基溴化铵，再通过高温煅烧制得，其具有大的比表面积以及丰富孔道结构，主要用于提高物载体的载量。

(2)红细胞膜的包裹使其合成的纳米粒子可以有效的躲避生物屏障，进行全身的血液循环，实现纳米粒子在肿瘤中的高效蓄积。

(3)生物素的修饰使得物载体进行主动靶向，进一步提高了其在肿瘤部位的聚集。本文展现了提高载体生物相容性、长循环以及在肿瘤部位的聚集，可用于肿瘤部位物的递送。

(5)生物素修饰的红细胞膜包裹介孔二氧化硅负载的抗癌物(Bio–RBCm@MSN–DOX)，将生物素修饰后的红细胞膜(Bio–RBCm)和负载抗癌物的介孔二氧化硅MSN–DOX)加入到PBS溶液中(生物素修饰后的红细胞膜、负载抗癌物的介孔二氧化硅和PBS溶液的质量比为1:1:40)，在超声浴中处理30min，充分分散后，用脂质体挤出器过滤，得到具有生物素修饰红细胞膜包覆的介孔二氧化硅纳米粒子。为了提高产品的保质期，可以进行冷冻干燥。

图1为Bio‑RBCm@MSN‑DOX、RBCm@MSN‑DOX、RBCm、MSN‑DOX的透射电镜图，图a为Bio‑RBCm@MSN‑DOX透射电镜图，比例尺为200纳米；图b为Bio‑RBCm@MSN‑DOX的高倍透射电镜图，比例尺为10纳米；c为挤出的红细胞膜囊泡的透射电镜图，比例尺为200纳米；dRBCm@MSN‑DOX的透射电镜图，比例尺为200纳米；

图2为Bio‑RBCm@MSN‑DOX、RBCm@MSN‑DOX、RBCm vesicle、MSN‑DOX粒径分布图；

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